论文摘要
目的采用体外培养的大鼠脑神经干细胞（neural stem cell, NSCs）,了解γ-分泌酶抑制剂DAPT对神经干细胞分化和增殖能力的影响,检测Notch通路的信号分子基因表达的情况以及明确与Notch信号调控相关的蛋白质分子及其他与NSCs生物学特性相关的蛋白质,探讨DAPT调控神经干细胞增殖和生长的可能机制。方法1.采用无血清神经球培养法,从出生23d的大鼠脑皮质分离培养NSCs,用免疫荧光细胞染色方法对培养4周的NSCs进行自我更新能力﹑特异性标志和多向分化能力等方面的鉴定,并将证实为NSCs的细胞用于本研究的实验。2.经200nmol/L的DAPT处理后的NSCs,用RT-PCR法检测Notch通路信号分子（包括RBP-JK, HES 1）的表达情况。3.用CCK-8法和细胞计数法检测在200nmol/L DAPT作用下NSCs的增殖速率。4. 200nmol/L的DAPT处理后的NSCs经1%胎牛血清诱导72h后,用免疫荧光染色结合细胞计数的方法,观察其分化为神经元、神经胶质细胞和少突胶质细胞的比例。5. 200nmol/L的DAPT处理后的NSCs经1%胎牛血清诱导72h后,提取细胞总蛋白,用双向电泳法分离蛋白,并选取与对照组表达显著差异的蛋白质点进行质谱分析,明确与Notch信号调控相关的蛋白质分子及其他与NSCs生物学特性相关的蛋白质。