论文摘要
本论文共分五章。第一章为引言。主要介绍了甜菜夜蛾及其防治状况，杆状病毒的主要特征及应用情况，细胞凋亡抑制蛋白IAP以及组织蛋白酶B（CB）的研究概况。第二章主要内容为甜菜夜蛾抑制凋亡基因iap在哺乳动物细胞293 HEK中的功能研究。我们从甜菜夜蛾脂肪体中提取总RNA，反转录成cDNA做为模板，根据GenBank中公布的甜菜夜蛾iap序列设计引物，扩增出甜菜夜蛾iap基因，其大小为1134 bp。将PCR产物克隆到真核表达载体pGEFP-C1。用鉴定正确的重组质粒pEGFP-iap转染293 HEK细胞，并用治疗肿瘤的药物顺铂（cisplatin）诱导细胞凋亡。通过对比实验组及对照组细胞的存活率，表明甜菜夜蛾iap基因在哺乳动物细胞中发挥了预期的抑制凋亡功能。第三章主要内容为甜菜夜蛾核型多角体病毒（Spodoptera exigua nucleopolyhedrovirus，SeNPV）抑制凋亡基因iap2及iap3在哺乳动物细胞293HEK中的功能研究。我们以SeNPV基因组为模板，根据已知的杆状病毒iap基因序列设计引物，采用PCR技术扩增出SeNPV的iap2、iap3基因，其大小分别为951 bp和939 bp。将PCR产物克隆到真核表达载体pGEFP-C1。用鉴定正确的重组质粒pEGFP-iap2、-iap3分别转染293 HEK细胞，并用治疗肿瘤的药物顺铂（cisplatin）诱导细胞凋亡。通过对比实验组及对照组细胞的存活率，表明甜菜夜蛾病毒iap3基因在哺乳动物细胞中发挥了预期的抑制凋亡功能。第四章主要内容为棉铃虫抑制凋亡基因iap的获得。我们从棉铃虫脂肪体中提取总RNA，反转录成cDNA做为模板，根据鳞翅目昆虫粉蚊夜蛾（Trichoplusia ni），草地贪夜蛾（Spodoptera frugiperda）的iap基因的同源序列，设计引物，扩增出棉铃虫iap基因的一段保守序列。再根据测序结果设计引物分别进行3’RACE和5’RACE扩增，将所得片段克隆至pMD18-T载体并测序，以获得棉铃虫iap基因的cDNA全长。第五章主要内容为甜菜夜蛾组织蛋白酶B基因cb的获得。我们从甜菜夜蛾血淋巴中提取总RNA，反转录成cDNA做为模板，根据本实验室已经获得的甜菜夜蛾cb基因中间段及3’RACE序列设计引物，进行5’RACE扩增，将所得片段克隆至pMD18-T载体并测序，以获得甜菜夜蛾cb基因的cDNA全长。
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标签：甜菜夜蛾论文; 甜菜夜蛾核型多角体病毒论文; 细胞凋亡论文; 功能研究论文;