论文摘要
目的：血吸虫病是一种重要的人兽共患寄生虫病，其疫苗的研究是防治该病的重要措施之一。迄今所研制出的一些日本血吸虫亚单位基因工程疫苗保护力效果还不够理想，加强多价疫苗的研究也是探索提高疫苗保护效果的有效途径之一。本研究应用基因工程技术研制由多个不同抗原表位富集区组成的抗日本血吸虫多价核酸疫苗和多价重组抗原疫苗，通过对小鼠进行的免疫保护实验比较不同的疫苗所诱导的免疫保护效果，以期寻找到具有更高保护力的抗日本血吸虫疫苗。 方法：本研究通过生物信息学的方法预测和筛选了日本血吸虫抱雌沟蛋白（SjGCP）的抗原表位，应用PCR技术扩增了日本血吸虫23KDa表膜蛋白（Sj23），日本血吸虫谷胱甘肽-S-转移酶（Sj28 GST）和日本血吸虫抱雌沟蛋白（SjGCP）的各一段富含表位的肽段所对应的编码核苷酸片段，运用基因工程重组技术将此三种核苷酸片段以不同的组合方式分别插入载体pCMV-手写体的和pGEX-2T的中，构建成了pCMV-BSj23-BSj28的，pCMV-BSjGCP-BSj23，pCMV-BSjGCP-BSj23-BSj28三种多价核酸疫苗及pGEX-BSj23-BSj28，pGEX-BSjGCP-BSj23，pGEX-BSjGCP-BSj23-BSj28三种原核表达质粒。三种真核质粒pCMV-BSj23-BSj28的，pCMV-BSjGCP-BSj23，pCMV-BSjGCP-BSj23-BSj28的经纯化后直接以肌肉注射的方法免疫昆明系小鼠，将三种重组原核表达质粒pGEX-BSj23-BSj28，pGEX-BSjGCP-BSj23，pGEX-BSjGCP-BSj23-BSj28的转化BL21后进行了诱导表达和纯化，结合福氏佐剂以皮下注射的方式免疫BalB／c小鼠。三免后，用日本血吸虫尾蚴分别攻击感染小鼠，42天后剖杀冲虫并计数。 结果：成功构建了三种重组的真核表达质粒pCMV-BSj23-BSj28，pCMV-BSjGCP-BSj23，pCMV-BSjGCP-BSj23-BSj28，并在免疫保护试验中分别获得了6.30％，14.76％和64.95％的减虫率：成功制备了三种重组抗原疫苗pGEX-BSj23-BSj28的，pGEX-BSjGCP-BSj23，pGEX-BSjGCP-BSj23-BSj28的，并在免疫保护实验中分别获得了13.65％，15.7％和57.99％的减虫率。 结论：重组的多价核酸疫苗pCMV-BSjGCP-BSj23-BSj28的和重组的多价抗原pGEX-BSjGCP-BSj23-BSj28的在动物免疫实验中获得了较好的免疫保护效果，表明该种构建彩价疫苗的方法具有潜在的应用价值。
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- [1].细菌菌影疫苗的研究进展[J]. 微生物学免疫学进展 2016(03)