生物与化学分析方法在诊断试剂标准品制备中的应用

论文摘要

目的由于心肌损伤和子宫颈癌对于人们身体健康的威胁越来越大,因此对于心肌钙蛋白Ⅰ（Cardiac troponin I, cTnI）和人乳头瘤病毒（Human Papiliomavirus, HPV）研究也越来越引起人们的重视。心肌钙蛋白Ⅰ是组成心肌钙蛋白复合物的亚单位之一,已被临床确定为诊断心肌损伤的确定标志物。人乳头瘤病毒是一种不具备外膜的环状双链结构的DNA病毒。在临床上被作为诊断子宫颈癌的重要指标。目前国内外已有多家用于检测cTnI和HPV的相关产品,但我国国内尚无cTnI国家标准品和全基因组HPV分型国家质控品对其进行评估。而本研究旨在通过对cTnI标准品和全基因组HPV基因分型DNA质控品的制备、分析、验证和应用的研究,来为以后的相关国家标准物质的研制提供实验基础。方法使用基质辅助激光解析电离化/飞行时间质谱（MALDI-TOF-MS）,液质联用（Q-TOF-MS和LC-ITMS）, ELFA （酶联荧光分析）方法,固相、夹心法化学发光免疫测定法,分子生物学方法（PCR-杂交法）和毛细管电泳测序技术（CAE）,表面等离子谐振方法（SPR）等方法对cTnI标准品和全基因组HPV基因分型DNA质控品进行制备和分析。并使用制备的全基因组HPV基因分型DNA质控品对相关产品进行评价。结论完成了cTnI标准品的制备、定性和赋值工作。完成了全基因组HPV基因分型DNA质控品的研制和验证工作,并且将其进行了应用,取得了较好的结果。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 目录
• 第一章 绪论
• 1.1 引言
• 1.2 cTnⅠ的概述
• 1.2.1 cTnⅠ的生物学特性
• 1.2.2 cTnⅠ的临床应用
• 1.2.3 cTnⅠ的检测方法
• 1.2.4 影响cTnⅠ检测结果的因素
• 1.2.5 cTnⅠ的标准化研究
• 1.3 人乳头瘤病毒的概述
• 1.3.1 人乳头瘤病毒的生物学特性
• 1.3.2 人乳头状瘤病毒致病机理
• 1.3.3 人乳头状瘤病毒相关的疾病
• 1.3.4 人乳头状瘤病毒检测方法
• 1.3.5 人乳头状瘤病毒标准品的研究现状
• 1.4 本论文的立题思想
• 第二章 制备cTnⅠ标准品
• 2.1 实验材料及试剂
• 2.1.1 基质材料
• 2.1.2 主要试剂
• 2.1.3 溶液配制
• 2.1.4 实验设备与仪器
• 2.2 实验部分
• 2.2.1 cTnⅠ标准品的制备过程
• 2.2.2 对制备的cTnⅠ标准品进行定性分析
• 2.2.3 对制备的cTnⅠ标准品进行初步定量
• 2.3 结果与讨论
• 2.3.1 MALDI-TOF进行初步定性分析的检测结果
• 2.3.2 Q-TOF进行定性分析的检测结果
• 2.3.3 LC-ITMS进行定性分析的检测结果
• 2.3.4 使用ELFA（酶联荧光分析）方法对标准品进行检测的结果
• 2.3.5 使用固相、夹心法化学发光免疫测定法对标准品进行检测的结果
• 2.3.6 cTnⅠ标准品的初步赋值
• 2.4 本章小结
• 第三章 制备全基因组人乳头瘤病毒（HPV）DNA质控品
• 3.1 HPV基因分型DNA质控品的制备
• 3.1.1 实验材料
• 3.1.2 质粒DNA制备过程
• 3.1.3 质粒的鉴定
• 3.1.4 质粒提取、浓度测定、分装、保存
• 3.1.5 结果
• 3.1.6 讨论
• 3.2 全基因组HPV基因分型DNA质控品的检验
• 3.2.1 实验材料
• 3.2.2 方法
• 3.2.3 结果
• 3.2.4 结论
• 3.3 全基因组人乳头状瘤病毒（HPV）基因型DNA质控品的应用
• 3.3.1 应用于HPV检测试剂盒（PCR-杂交法）的检测
• 3.3.2 应用于HPV检测试剂盒（荧光定量PCR法等方法）的检测
• 3.4 本章小结
• 结论
• 致谢
• 参考文献
• 附录