论文题目: 小鼠盲肠结扎穿孔模型血浆蛋白质组变化的初步研究
论文类型: 博士论文
论文专业: 普通外科学
作者: 王建东
导师: 李荣,徐迎新,刘斯奇
关键词: 脓毒症,盲肠结扎穿孔,血浆蛋白质组学,双向凝胶电泳,质谱
文献来源: 中国人民解放军军医进修学院
发表年度: 2005
论文摘要: 研究目的 1.建立血浆蛋白质组研究平台,掌握去除小鼠血浆白蛋白的方法以及进行血浆2-DE所需要的各种条件。2.了解CLP术后不同时间段小鼠血浆蛋白质组的变化规律,为进一步研究脓毒症的发病机制奠定基础。 研究方法 1.应用SDS-PAGE、2-DE及胶图分析软件对各种条件下去除血浆白蛋白的效果做出评价,从中选择最佳方案。2.制备盲肠结扎穿孔(CLP)动物模型,假手术组只游离盲肠、不做结扎及穿孔作为对照组。在术后不同的时间点抽取血液,去除血浆中的白蛋白后,再行2-DE。同组相同时间点的5个个体胶图做一个虚拟平均胶,然后将同一时间点的CLP组与假手术组的虚拟平均胶匹配,再到个体胶图中比对,确认差异蛋白质斑点,对其行胶内消化、MALDI-TOF-MS质谱仪鉴定、数据库搜索。 研究结果 1.使用DEAE-Cibacron Blue 3GA可去除80%的血浆白蛋白。去除白蛋白后,2-DE显示的蛋白质斑点由处理前的211±19个增加到392±11个,而且许多斑点的蛋白质表达量也明显增加,并可发现更多的差异点。同一个体的平行胶图的平行性、可重复性满意,显示的蛋白斑点在分布、表达量和染色、背景等方面基本一致。2.虚拟平均胶匹配分析发现,在术后4h,CLP组与假手术组有43个蛋白质斑点未能匹配,但将这些差异点在个体胶中分析,均未能在4对以上的胶图中出现。3.使用虚拟平均胶匹配分析发现,术后24h时CLP组与假手术组共有122个蛋白质斑点未能匹配;在个体胶中加以分析后,证实CLP组较假手术组有39个斑点上调,其中18个为新出现的;CLP组中无下调的蛋白质斑点。经胶内消化、质谱鉴定、蛋白质数据库搜索发现,有33个斑点得到鉴定,分属于8种蛋白质:补体c3、富亮氨酸α2糖蛋白、低分子量激肽原、α1酸性糖蛋白、α1抗胰蛋白酶、血清淀粉样蛋白P、血红素结合蛋白、转铁蛋白。
论文目录:
中文摘要
英文摘要
前言
第一部分 小鼠血浆蛋白质组技术平台的建立
材料与方法
结果
讨论
参考文献
第二部分 盲肠结扎穿孔小鼠的血浆蛋白质组双向凝胶电泳—飞行时间质谱分析
材料与方法
结果
讨论
参考文献
结论
综述
攻读学位期间发表文章情况
致谢
发布时间: 2005-07-15
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