论文题目: 白芍总苷抗肝纤维化作用及其对肝星状细胞G蛋白偶联信号转导的影响
论文类型: 博士论文
论文专业: 药理学
作者: 王华
导师: 魏伟
关键词: 白芍总苷,大鼠,肝纤维化,肝星状细胞,血小板衍生生长因子,转化生长因子,蛋白,药理作用
文献来源: 安徽医科大学
发表年度: 2005
论文摘要: 肝纤维化是一种严重危害人类健康的疾病,其共同的病理改变是细胞外基质（extracellular matrix,ECM）的过度沉积,肝星状细胞（hepatic stellate cell,HSC）的表型激活是肝纤维化形成过程的关键,其中活化的HSC大量增殖和胶原的过度生成是导致ECM大量沉积的重要原因。目前治疗肝纤维化手段仍不尽人意,深入了解肝纤维化分子作用机制,寻找新的抗纤维化药物具有重要理论和实际意义。白芍总苷（Total glucosides of paeony,TGP）是祖国传统中药白芍根中提取的有效部位,本课题组以往的研究发现,TGP具有抗炎、抗氧化、免疫调节、抗肝损伤和免疫性肝纤维化等作用。本研究采用经典的CCl4诱导的肝纤维化模型,首先从整体上考察了TGP的抗化学性肝纤维化作用,然后选用HSC-T6细胞株,研究了TGP体外抑制血清和细胞因子血小板衍生生长因子BB（platelet-derived growth factor,PDGF-BB）、转化生长因子β1（transforming growth factor β1,TGF-β1）刺激HSC-T6细胞增殖和胶原合成的抑制作用的量效和时效关系,最后采用Western-blot技术从蛋白表达水平观察了TGP对PDGF-BB、TGF-β1刺激后的G蛋白表达改变情况,进而对TGP抑制HSC-T6细胞增殖和胶原合成与G蛋白-AC-cAMP通路的关系作了初步探讨。 1.TGP对CCl4诱导化学性肝纤维化大鼠的保护作用 TGP两个剂量(60、120mg·kg-1)对CCl4诱导化学性肝纤维化大鼠具有明显的保护作用。结果表明,给予TGP(60、120mg·kg-1)和Col(0.1mg·kg-1)ig给
论文目录:
英文缩略词表
中文摘要
英文摘要
1.前言
2.材料与方法
2.1 实验材料
2.1.1 动物和细胞株
2.1.2 药物与试剂
2.1.3 仪器与设备
2.2 实验内容和方法
2.2.1 CCl_4致大鼠化学性肝纤维化模型的制备
2.2.2 实验分组与给药方案
2.2.3 大鼠KC和HSC的分离与培养
2.2.4 KC炎性细胞因子的诱导与检测
2.2.5 原代HSC的增殖实验与产生胶原的检测方法
2.2.6 HSC-T6细胞增殖和胶原合成的检测方法
2.2.7 ALT和AST活性测定
2.2.8 肝组织羟脯氨酸含量测定
2.2.9 血清HA、LN含量的测定
2.2.10 血清PCⅢ、CⅣ测定
2.2.11 MDA含量测定
2.2.12 SOD活性测定
2.2.13 GSH-px活性测定
2.2.14 NO含量测定
2.2.15 血清TGF-β1和PDGF水平的测定
2.2.16 TNF-α和IL-1β水平的测定
2.2.17 肝脏病理组织学观察及评分标准
2.2.18 肝脏免疫组织化学(S-P)染色方法
2.2.19 Western blot检测HSC细胞膜的G蛋白和I型胶原的表达
2.2.20 HSC cAMP的测定
2.2.21 统计处理
3.结果
3.1 TGP对CCl4诱导的化学性肝纤维化大鼠的保护作用
3.1.1 TGP对CCl4诱导的化学性肝纤维化大鼠血清转氨酶和白／球比值的影响
3.1.2 TGP对CCl4诱导的化学性肝纤维化大鼠血清HA、LN、PCⅢ和CⅣ含量的影响
3.1.3 TGP对CCl4诱导的化学性肝纤维化大鼠肝匀浆Hyp的影响
3.1.4 TGP对CCl4诱导的化学性肝纤维化大鼠肝脏病理组织学的影响
3.1.5 TGP对CCl4诱导化学性肝纤维化大鼠肝匀浆MDA，SOD和GSH-Px水平的影响
3.1.6 TGP对CCl4诱导化学性肝纤维化大鼠血清TNF-α、IL-1β和NO含量的影响
3.1.7 TGP对CCl4诱导化学性肝纤维化大鼠血清TGF-β1和PDGF含量的影响
3.1.8 TGP对CCl4诱导化学性肝纤维化大鼠肝组织TGF-β1和PDGF-BB表达的影响
3.1.9 TGP对CCl4诱导化学性肝纤维化大鼠HSC增殖和产生胶原的影响
3.1.10 TGP对CCl4诱导化学性肝纤维化大鼠肝组织MMP和TIMP表达的影响
3.1.11 TGP对CCl4诱导化学性肝纤维化大鼠KC产生TNF-α、IL-1β和NO的影响
3.1.12 体外不同浓度的TGP对正常和模型组大鼠KC产生TNF-α、IL-1β和NO的影响
3.2 TGP对不同条件刺激下HSC-T6细胞增殖和胶原合成的影响
3.2.1 体外不同浓度TGP的毒性作用
3.2.2 TGP对PDGF-BB刺激HSC-T6细胞增殖的影响
3.2.3 TGP对TGF-β1刺激HSC-T6细胞胶原合成的影响
3.2.4 TGP对混合血清刺激HSC-T6细胞增殖和胶原的影响
3.3 PDGF-BB诱导的HSC-T6细胞G蛋白-AC-cAMP通路改变及TGP的作用
3.3.1 PDGF-BB诱导的HSC-T6细胞膜Gi1、Gi2、Gi3、和Gs表达水平变化
3.3.2 PDGF-BB诱导的HSC-T6细胞cAMP产生的影响及其与增殖反应的关系
3.3.3 TGP对PDGF-BB诱导的HSC-T6细胞膜Gi2表达水平变化的影响
3.3.4 TGP对PDGF-BB诱导的HSC-T6细胞cAMP产生和细胞增殖反应的影响
3.4 TGF-β1诱导的HSC-T6细胞G蛋白-AC-cAMP通路改变及TGP的作用
3.4.1 TGF-β1诱导的HSC-T6细胞Gi1、Gi2、Gi3和Gs表达水平变化
3.4.2 TGF-β1诱导的HSC-T6细胞cAMP产生的影响
3.4.3 TGP对TGF-β1诱导的HSC-T6细胞Gi2、Gs、I型胶原表达水平变化影响
3.4.4 TGP对TGF-β1诱导HSC-T6细胞cAMP产生和胶原合成的影响
4.讨论
4.1 TGP对大鼠CCl4性肝纤维化的保护作用
4.2 TGP的抗氧化和对抑制炎性细胞因子生成作用
4.3 TGP对HSC细胞增殖和胶原合成的影响
4.4 HSC增殖反应和胶原合成的G蛋白-AC-cAMP通路改变以及TGP的作用
5.结论
参考文献
附录
致谢
综述：肝星状细胞的激活及其细胞内信号转导机制研究进展
发布时间: 2005-09-07
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