前体蛋白加工酶5在小鼠围着床期子宫中的表达研究

论文摘要

前体蛋白加工酶5是前体蛋白加工酶（proprotein convertase,PCs）家族成员之一。大多数蛋白在合成时都是以无活性的前体形式存在的,只有通过PCs的剪切最终转变为生物活性形式。实验表明PCSK5水解的底物是一些生长因子和受体等,例如表皮生长因子（Epidermal growth factor,EGF）和激活素（Activin A）等,已有实验证明其中的一些生长因子在小鼠着床过程中起着重要作用,推测PCSK5可能在胚胎着床中起作用,然而有关PCSK5在小鼠围着床期的表达还没明确的报道。本研究利用原位杂交方法,检测了PCSK5 mRNA在小鼠早期妊娠、假孕、延迟着床及激活、人工蜕膜化、性腺类固醇激素处理的小鼠子宫中的表达,并利用RT-PCR检测了PCSK5 mRNA在子宫基质细胞体外诱导蜕膜化中的表达。在小鼠妊娠第1-4天子宫中,检测不到PCSK5 mRNA信号,当妊娠第5天胚胎着床时,PCSK5 mRNA在胚胎着床位点处周围的基质细胞中呈很强的特异性表达。在妊娠第6-8天,PCSK5 mRNA在初级蜕膜区有高水平表达。说明PCSK可能参与胚胎的着床和基质细胞的蜕膜化过程。在假孕和延迟着床的小鼠子宫中没有检测到PCSK5 mRNA的表达,在延迟着床激活模型中PCSK5 mRNA的表达呈现类似正常妊娠第5天的特异性强表达,说明PCSK5的表达方式属于胚胎着床特异性表达,并且受活化胚泡的诱导。人工诱导蜕膜化的子宫中,PCSK5 mRNA在初级蜕膜区有高水平表达。在子宫基质细胞体外诱导蜕膜化中,PCSK5 mRNA随着细胞蜕膜化的进行而逐渐升高。PCSK5可能参与基质细胞的蜕膜化过程。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 1 引言
• 1.1 胚胎着床及蜕膜化
• 1.1.1 胚胎着床
• 1.1.2 子宫内膜的蜕膜化反应
• 1.2 前体蛋白加工酶5 的研究进展
• 1.2.1 PCSK5 的结构
• 1.2.2 前体蛋白加工酶5 的转录后加工
• 1.3 前体蛋白加工酶5（PCSK5）的生物学功能
• 1.3.1 PCSK5 与胚胎发育
• 1.3.2 PCSK5 和神经元生长和凋亡
• 1.3.3 PCSK5 和风湿性关节炎
• 1.3.4 PCSK5 和肿瘤细胞转移
• 1.3.5 PCSK5 和致病病毒
• 1.4 研究的目的和意义
• 2 材料和方法
• 2.1 实验动物
• 2.2 动物模型及取材
• 2.2.1 早期妊娠
• 2.2.2 假孕
• 2.2.3 延迟着床和激活
• 2.2.4 人工蜕膜化
• 2.2.5 性腺类固醇激素处理
• 2.2.6 小鼠子宫基质细胞体外诱导蜕膜化
• 2.3 原位杂交
• 2.3.1 cRNA 探针的制备
• 2.3.2 冰冻切片制备
• 2.3.3 原位杂交
• 2.4 子宫基质细胞体外蜕膜化培养
• 2.4.1 培养前准备工作
• 2.4.2 小鼠子宫内膜细胞培养溶液
• 2.4.3 小鼠子宫内膜细胞体外蜕膜化培养流程
• 2.5 小鼠子宫内膜细胞体外蜕膜化RT-PCR 半定量分析
• 3 结果
• 3.1 探针制备
• 3.1.1 扩增片段插入方向的鉴定
• 3.1.2 扩增片段测序结果分析
• 3.2 PCSK5 在小鼠围着床期子宫中的表达
• 3.2.1 PCSK5 mRNA 在小鼠早期妊娠子宫中的表达
• 3.2.2 PCSK5 mRNA 在假孕小鼠子宫中的表达
• 3.2.3 PCSK5 mRNA 在小鼠延迟着床及激活子宫中的表达
• 3.2.4 PCSK5 mRNA 在小鼠人工蜕膜化子宫中的表达
• 3.2.5 雌激素和孕酮对PCSK5 在小鼠子宫中表达的影响
• 3.2.6 小鼠子宫内膜细胞体外蜕膜化的培养
• 3.2.7 PCSK5 在体外诱导蜕膜化细胞RT-PCR 半定量分析
• 4 讨论
• 4.1 PCSK5 与胚胎着床
• 4.2 PCSK5 与蜕膜化
• 5 结论
• 致谢
• 参考文献
• 图版
• 攻读硕士学位期间发表的论文