新型脂质-HAP-DNA复合体用于基因转染研究

论文摘要

基因治疗是将基因导入人体细胞中,以期产生有益的蛋白质来治疗疾病的一种方法。1995年,美国国立卫生组织（NIH）提出基因治疗目前存在的三大关键问题之重点问题便是:具有良好选择性、安全性和高效性的基因导入系统（即基因载体）。非病毒载体由于具有低毒,低免疫反应,靶向性和易于组装等优点,但转染效率一直不高。如何提高DNA在基因转染和基因治疗中的转染效率成为-基因转导技术的关键问题。因此寻找新的非病毒载体成为目前的研究热点。 本研究自行组装构建了一种新型非病毒基因载体脂质-HAP-DNA复合体（Lipid—Hydroxyapatite—DNA,LHD）并验证其用作基因转导的可行性。本论文分为三个部分: 第一研究了HAP纳米粒子的制备与改性。通过该部分研究我们得到如下结论: 1.运用化学沉淀法合成了HAP纳米颗粒并进行了表面改性。得到了Ca/P比接近1.67的HAP纳米颗粒,在缓冲液中稳定性及分散性良好、粒径均匀、符合下一步研究需要。 2.利用有机大分子A作为稳定剂,改性后HAP表面Zeta电位为正,在缓冲液中可长时间稳定存在。 3.化学沉淀法合成纳米HAP时,反应温度、PH值对产物HAP的影响显著,溶液浓度对产物HAP影响不大。 4.超声处理、滴加速度及搅拌强度作为辅助手段会对制备所得纳米HAP晶体尺寸产生影响,而稳定剂种类和剂量会显著影响生成纳米HAP的表面特性。 第二进行了LHD复合体的制备研究。得到如下结论: 1.用正电荷的纳米HAP分别与不同比例的DNA结合,最终确定b DNA与HAP的较为合适的结合比例。 2.用反相蒸发法将DNA—HAP复合物包裹进入脂质膜中,制备得到LHD复合体。观察到合成的LHD复合体成球形、具有一定包封率,并且对被包裹的DNA起到有效的保护作用。 3.在LHD复合体的制备中,进行了温度变化和光线照射对卵磷脂氧化率和LHD的包封率的影响的研究。确定了实验的防氧化措施及贮存方法。

论文目录

• 第1章 前言
• 第2章 研究背景综述
• 2.1 引言
• 2.2 脂质体基因载体
• 2.3 无机纳米基因载体
• 2.4 纳米 HAP的特性、制备及改性技术
• 2.4.1 生物学性能
• 2.4.2 HAP的结构
• 2.4.3 HAP纳米粒子的制备技术发展
• 2.4.5 HAP的表面特性
• 2.4.6 纳米 HAP的表面改性方法
• 2.5 研究的目的与范围
• 第3章 纳米 HAP的制备及表面改性研究
• 3.1 引言
• 3.2 材料与方法
• 3.2.1 仪器与试剂
• 3.2.2 实验方法
• 3.2.3 实验结果
• 3.3 讨论
• 3.3.1 引入超声处理对制备 HAP的辅助作用
• 3.3.2 滴加速率和搅拌强度的辅助作用
• 3.3.3 稳定剂种类与剂量的影响
• 3.4 结论
• 第4章 脂质-HAP-DNA复合体的制备
• 4.1 引言
• 4.2 实验方法
• 4.2.1 仪器与试剂
• 4.2.2 实验过程
• 4.2.3 实验结果
• 4.2.4 讨论
• 4.3 结论
• 第5章 脂质-HAP-DNA复合物的体外转染
• 5.1 引言
• 5.2 材料与方法
• 5.2.1 实验材料
• 5.2.2 工作溶液
• 5.2.3 仪器设备
• 5.3 实验方法
• 5.3.1 实验过程
• 5.3.2 实验结果
• 5.3.3 讨论
• 5.4 结论
• 第6章 主要结论
• 6.1 主要结论
• 6.2 有待进一步研究的问题
• 6.3 课题创新点
• 参考文献
• 致谢
• 攻读硕士学位期间发表论文与参加的科研项目