白藜芦醇短期内干预对高脂模型小鼠脂代谢及SIRT1，PPARα，CYP7A1表达影响的实验研究

论文摘要

前言近几年来,我国城乡居民的膳食、营养状况有了明显改善,营养不良和营养缺乏患病率继续下降,但是营养过剩所引发的慢性非传染性疾病问题却日益突出。据2002年中国居民营养与健康现状调查结果显示,我国成人冠心病、高血压患病率呈明显上升趋势,而血脂异常是动脉粥样硬化、冠心病和高血压等心血管疾病发生发展的重要危险因素。因此,预防和控制血脂异常有着十分重要的意义。法国人的饮食中含有大量脂肪,而心血管疾病的发病率和死亡率却显著低于欧洲其他国家,这与其日常大量饮用红酒有关,红酒中富含的白藜芦醇（resveratrol,RSV）可能起保护作用。白藜芦醇能够提高沉默信息调节因子1（silent information regulatorl,SIRT1）酶活性并提高其乙酰化底物的亲和力,是SIRT1的功能激活剂。而SIRT1能够使过氧化物酶体增殖物激活受体-α（pemxisome proliferative activated receptor-a, PPARa）去乙酰化,PPARα参与胆固醇代谢过程中的关键酶——胆固醇7α-羟化酶（cholesterol-7a-hydroxylase, CYP7A1）的调节,进而影响胆固醇的内稳态,而CYP7A1的转录表达是依赖PPARa的。但SIRT1能否通过调节PPARa影响胆固醇水平,并通过上调CYP7A1的表达进而影响脂代谢目前还未见相关报道。因此,本研究采用白藜芦醇对高脂模型小鼠进行干预,观察其对小鼠脂代谢的影响以及小鼠肝脏SIRT1、PPARa和CYP7A1在mRNA水平的表达,旨在探讨白藜芦醇对小鼠脂代谢的影响及其分子机制。材料与方法一、动物的分组50只8w龄,体重18g-22g健康雄性昆明种小鼠,适应性饲养1w后,根据体重随机分为2组：基础组（10只）,高脂模型组（40只）。4w后,由内眦静脉采血约0.5ml,测定血清总胆固醇（Total cholesterol, TC）水平,按血清TC水平将高脂模型组随机分为4组（每组10只）：高脂组、干预Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组。二、干预过程和样品采集基础组喂饲基础饲料,高脂组和各干预组喂饲高脂饲料（其构成为：92%的基础饲料,6.75%猪油,1%胆固醇和0.25%的胆盐）。基础组和高脂组给予0.5%的羧甲基纤维素钠溶液灌胃；白藜芦醇均以0.5%的羧甲基纤维素钠溶解后分别经灌胃给予干预Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组不同浓度白藜芦醇5mg／（kg·bw·d）、22.5mg／（kg·bw·d）、45mg／（kg·bw·d）。干预6w后,小鼠禁食12h,乙醚麻醉,摘眼球取血约1～2ml,离心分离血清。分离肝脏,称重；取材制作石蜡切片,进行HE染色；检测肝脏中SIRT1、PPARa和CYP7A1 mRNA的表达量。三、指标分析（一）血脂的测定按试剂盒说明,采用ECOM-F6124半自动生化分析仪测定血清中总胆固醇（total cholesterol, TC）、甘油三酯（triglyceride, TG）、低密度脂蛋白胆固（low-density lipoprotein cholesterol, LDL-C）、高密度脂蛋白胆固醇（high-density lipo protein cholesterol, HDL-C）。（二）氧化指标的测定按试剂盒说明,采用Multiskan MK3酶标仪测定血清及肝组织中丙二醛（Maleic dialdehyde, MDA）、超氧化物歧化酶（Superoxide dismutase, SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（Glutathione peroxidase, GSH-Px）、总抗氧化能力（Total antioxidant capacity, T-AOC）。（三）检测各组小鼠肝脏病理改变观察各组小鼠肝脏色泽和质地,取部分肝组织制作石蜡切片,进行HE染色；观察小鼠肝组织病理学改变。（四）计算肝指数肝指数（%）=肝重（g）／体重（g）×100。（五）肝脏中mRNA表达量的测定按TRIzol说明书操作步骤,提取30-50mg小鼠肝组织的总mRNA。取总RNAlμl,按Takara RNA PCR试剂盒说明,进行RT-PCR反应。取2μl cDNA为模板,以β-肌动蛋白（β-actin）作为内参对照。RT-PCR各指标反应条件相同为：30℃10min,42℃30min,99℃5min,5℃5min。扩增反应条件为：94℃,2min预变性；33个循环包括：变性94℃30s、退火56℃30s、延伸72℃35s。再72℃延伸10min。5μl目的基因产物,加预染液预染3min；2%琼脂糖凝胶电泳,凝胶成像分析仪拍照,以与内参对照β-actin的比值作为目的基因表达的相对含量。四、数据处理和统计分析实验结果用x±s表示,用SPSS13.0统计软件进行单因素方差分析,组间两两比较用LSD法,检验水准为a=0.05。结果一、动物一般状况及体重增量实验期间,各组小鼠一般状况良好,生长发育未见异常表现。各组小鼠体重增量以干预Ⅰ组最高,但与其他各组比较,差异均无统计学意义（P>0.05）。二、各组小鼠肝指数各组小鼠肝指数间的差异均无统计学意义（P>0.05）。三、各组小鼠肝脏病理改变观察各组小鼠肝脏大体标本发现,基础组和干预Ⅰ、Ⅱ组小鼠肝脏颜色鲜红,边缘锐利,质地柔软,而高脂组和干预Ⅲ组小鼠边缘变钝,质地稍硬,切面呈油腻感。由各组小鼠肝脏病理切片可见,基础组小鼠肝细胞形态正常,几乎没有脂肪变性；高脂组小鼠的肝脏中均有部分肝细胞发生了脂肪变,但尚未达到脂肪肝的程度。各干预组的小鼠肝脏中仅有少数肝细胞发生了脂肪变。四、各组小鼠血脂水平比较各组小鼠TC、LDL-C水平,高脂组与基础组的差异均具有统计学意义（P<0.05）,LDL水平上,干预Ⅱ组与高脂组的差异具有统计学意义（P<0.05）。各干预组TG水平差异均无统计学意义（P>0.05）；各组HDL-C水平差异无统计学意义（P>0.05）。五、各组小鼠抗氧化水平1、血清抗氧化水平各组小鼠血清MDA, SOD, GSH-Px和T-AOC水平差异无统计学意义（P>0.05）。2、组织抗氧化水平比较各组小鼠MDA水平,以高脂组最高,其差异与其他各组均具有统计学意义（P<0.05）；各组SOD, GSH-PX, T-AOC水平差异无统计学意义（P>0.05）。六、各组小鼠肝脏中SIRT1、PPARα和CYP7A1 mRNA的相对表达量各组小鼠SIRT1、PPARα和CYP7A1 mRNA相对表达量差异均无统计学意义（P>0.05）。结论1、不同剂量白藜芦醇均有降低高脂模型小鼠血清TC和LDL-C水平的趋势,且干预Ⅱ组能明显降低LDL-C水平。2、不同剂量白藜芦醇均有升高高脂模型小鼠血清SOD水平的趋势,并能明显降低高脂模型小鼠肝脏MDA水平。3、各干预剂量以22.5mg／（kg·bw·d）白藜芦醇对高脂模型小鼠血脂水平和抗氧化水平的干预效果最佳。4、本研究未显示出白藜芦醇对高脂模型小鼠肝脏SIRT1, PPARα, CYP7A1 mRNA表达的影响,该结果可能是与干预时间短有关。

论文目录

• 一、摘要
• 中文论文摘要
• 英文论文摘要
• 二、英文缩略语
• 三、论文
• 前言
• 材料和方法
• 实验结果
• 讨论
• 结论
• 四、本研究创新性的自我评价
• 五、参考文献
• 六、附录
• 综述
• 致谢
• 个人简介