南蛇藤乙酸乙酯提取物对肝癌HepG2细胞毒作用及诱导其凋亡的实验研究

论文摘要

细胞凋亡是指为维持内环境稳定,由基因控制的细胞自主的有序的死亡。Caspases家族、Bcl-2家族、p53等多种因子都参与激活或调节细胞凋亡,其中Caspase-3广泛分布于各种不同类型的细胞中,是Caspase家族中最重要的凋亡执行者之一,激活的Caspase-3能使许多与细胞结构、细胞周期及DNA修复等相关蛋白或激酶失活,从而诱发细胞凋亡。从细胞凋亡这一新视角来揭示中药抗肿瘤的作用机制,筛选抗癌中药具有十分重要的意义。南蛇藤（Celastrus orbiculatus Thunb.）为卫矛科南蛇藤（celastrus）属植物,分布广泛,其藤茎、根、叶、果均可入药。现代药物化学研究证实,其具有抗肿瘤、抗炎镇痛、抗菌、抗病毒、抗生育等广泛的药理活性。目前,国内外对南蛇藤抗癌活性及机理研究有一定的报道。但对南蛇藤诱导肿瘤细胞凋亡及其途径的系统研究并不充分。本课题将以南蛇藤乙酸乙酯提取物为研究对象,观察其体外对肿瘤细胞增殖的抑制作用,并从细胞凋亡角度研究南蛇藤抗肿瘤细胞作用,为南蛇藤应用于开发研究奠定基础。目的：研究南蛇藤乙酸乙酯提取物体外抑制肿瘤细胞增殖和诱导肿瘤细胞凋亡的作用,初步探讨其诱导肿瘤细胞凋亡的途径,为南蛇藤的进一步研究开拓思路。方法：（1）采用cck-8法检测不同浓度南蛇藤乙酸乙酯提取物对肝癌HepG2细胞增殖的影响。（2）采用Annexin V-FITC与碘化丙啶（promide iodine,PI）双染色法通过流式细胞术检测南蛇藤乙酸乙酯提取物干预肝癌HepG2细胞24小时后的凋亡数。（3）应用流式细胞仪技术检测南蛇藤乙酸乙酯提取物干预24小时后,对肝癌HepG2细胞周期的影响。结果：（1）5个浓度的南蛇藤乙酸乙酯提取物（30、60、120、240、300μg/ml）对HepG2细胞均有一定的抑制作用,且呈剂量依赖性。经统计学分析差异显著（P<0.05）。（2）细胞早期凋亡（Annexin V-PI检测数据）表明随着南蛇藤提取物浓度（15-120μg/ml）的提高,凋亡细胞的数量在一定程度上有量效作用。（3）药物干预HepG2细胞24h后,细胞周期停滞在G0-G1期,其中240μg/ml最为显著（P=0.01）；同时HepG2细胞产生了亚二倍峰,说明发生了细胞凋亡。结论：南蛇藤乙酸乙酯提取物具有较强的体外抗肿瘤作用,凋亡是其杀伤肿瘤细胞的途径之一；抗肿瘤的机理是通过使细胞周期停滞在GO-G1期来抑制HepG2细胞的增长；

论文目录

• 目录
• 摘要
• Abstract
• 前言
• 第一部分 理论部分
• 1. 肝癌
• 1.1 流行病学
• 1.2 病因与病理学
• 1.3 临床诊断与分期标准
• 1.4 癌症治疗的方法
• 2 南蛇藤的药理介绍
• 3 细胞周期
• 3.1 周期调控蛋白
• 3.2 CDK
• 3.3 CKI
• 4 细胞凋亡
• 4.1 细胞凋亡的概念
• 4.2 细胞凋亡生物学改变和生物学意义
• 5 实验思路与设计
• 第二部分 南蛇藤乙酸乙酯提取物对肝癌HEPG2细胞生长抑制作用的实验研究
• 1. 材料
• 1.1 主要试剂与药物
• 1.2 细胞株
• 1.3 主要仪器设备
• 2. 方法
• 2.1 配制南蛇藤乙酸乙酯提取物
• 2.2 肝癌HepG2细胞培养及收集
• 2.3 倒置显微镜下肝癌HepG2细胞形态学观察
• 2.4 cck-8法检测南蛇藤提取物对肝癌HepG2细胞的生长抑制作用
• 3. 统计学处理
• 4. 结果
• 4.1 南蛇藤乙酸乙酯提取物干预肝癌HepG2细胞后的形态学变化
• 4.2 南蛇藤乙酸乙酯提取物对肝癌HepG2细胞的生长抑制作用
• 5 讨论
• 第三部分 南蛇藤乙酸乙酯提取物诱导肝癌细胞HEPG2凋亡的实验研究
• 1 材料
• 1.1 主要试剂与药物
• 1.2 细胞株
• 1.3 主要仪器设备
• 2 方法
• 3 统计学处理
• 4 结果
• 5 讨论
• 第四部分 南蛇藤乙酸乙酯提取物诱导肝癌HEPG2细胞凋亡的机制研究
• 1 材料
• 1.1 主要试剂与药物
• 1.2 细胞株
• 1.3 主要仪器设备
• 2 方法
• 3 统计学处理
• 4 结果
• 5 讨论
• 总结
• 结论
• 参考文献
• 附件
• 攻读硕士学位期间取得的学术成果
• 致谢