山茱萸果实中熊果酸的提取纯化研究

论文摘要

山茱萸为山茱萸科（Cornacoae）植物山茱萸（Cornus officinalis Sieb.et Zucc.）除去果核后的干燥成熟果肉,具有补益肝肾、涩精固脱之功效:现代研究证明山茱萸具有较好的调节免疫系统功能和显著的降血糖作用。熊果酸属于有机三萜酸,具有镇静、抗炎、增强机体免疫力、美白、抗癌等药理作用,近年更被中国医学科学院肿瘤医院实验证明其有望成为低毒、有效的新型天然抗癌药物,因而正日益受到众多学者的重视。本课题以山茱萸为原料提取、分离纯化熊果酸的工艺研究,详细总结了熊果酸的原植物研究近况、熊果酸的药理作用研究进展以及其分离纯化的方法:摸索出从山茱萸果实中提取、分离纯化熊果酸的工艺流程和最佳工艺条件。通过薄层色谱对山茱萸果实提取物进行定性鉴别,发现果实提取物在与熊果酸标准品相同Rf值的地方出现了相同的紫色斑点。分别采用冷浸法、索氏抽提法、回流提取法、微波辅助萃取法和超声波辅助萃取法对山茱萸果实中活性物质进行提取,并优化提取工艺,得出各提取法的最佳工艺参数,以提取得率和目的物纯度为指标,经过对比这五种提取方法的最佳工艺的提取效果,结果表明:五种提取法中以微波辅助提取法效率最高,效果最好,最佳提取工艺参数为提取时间6min,70%乙醇,微波炉功率300W,料液比1∶12,提取得率10.62%,纯度15.36%。用大孔树脂层析分离法分离纯化熊果酸,并对大孔树脂洗脱液浓度进行了筛选,再分步洗脱,收集体积分数为80%乙醇溶液（pH=10.0）的洗脱液,试验结果表明80%的乙醇（pH=10.0）洗脱效果最好,回收率为86.95%;纯度为76.64%。建立了一种快速分离检测熊果酸的方法——高效毛细管电泳法,具体分离条件为:以15mM磷酸氢二钠（Na2HPO4）—15mM硼砂（Na2B4O7）（pH=9.22）、含10%甲醇（v/v）的缓冲体系作为运行电解质溶液,检测波长214nm,分离电压20.0kV,可实现熊果酸分离检测,其含量为0.2171%。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 1 文献综述
• 1.1 山茱萸研究进展
• 1.1.1 山茱萸概况
• 1.1.2 山茱萸中化学成分的研究进展
• 1.1.3 熊果酸的研究进展
• 1.1.4 熊果酸提取及分离纯化的研究进展
• 1.2 生物活性物质研究现状
• 1.2.1 原料的预处理
• 1.2.2 生物活性物质的提取分离
• 1.2.3 生物活性物质的检测
• 2 引言
• 3 材料与方法
• 3.1 原料预处理
• 3.2 仪器与药品试剂
• 3.2.1 试验仪器
• 3.2.2 试验药品试剂
• 3.3 基本成分含量的测定
• 3.3.1 糖类的定量测定—3,5-二硝基水杨酸比色定糖法
• 3.3.2 总有机酸含量的测定—容量法
• 3.3.3 含氮量及粗蛋白量的测定—自动定氮仪法
• 3.3.4 Vc含量的测定—高效毛细管电泳法
• 3.3.5 熊果酸含量的测定—分光光度法
• 3.4 活性物质提取及分离纯化工艺的探讨研究
• 3.4.1 山茱萸果实提取液的制备及熊果酸检测方法的选择
• 3.4.2 熊果酸的提取方法及提取工艺优化
• 3.4.3 熊果酸的分离纯化方法及工艺优化
• 4 结果与分析
• 4.1 基本成分检测结果
• 4.2 熊果酸检测方法的选择
• 4.2.1 定性试验结果
• 4.2.2 分光光度法制备UA标准曲线及线性回归方程
• 4.2.3 HPCE检测方法的建立
• 4.2.4 分光光度和HPCE两种测定方法对比分析
• 4.3 熊果酸的提取方法及提取工艺优化
• 4.3.1 冷浸法与索氏提取法的结果分析
• 4.3.2 回流提取法试验结果及方差分析
• 4.3.3 超声波辅助提取法结果及方差分析
• 4.3.4 微波辅助提取法结果及方差分析
• 4.3.5 不同提取方法的比较
• 4.3.6 工艺流程
• 4.4 熊果酸的分离纯化方法及工艺优化
• 4.4.1 大孔吸附树脂吸附量与时间的关系
• 4.4.2 吸附溶剂pH值对吸附性能的影响
• 4.4.3 洗脱剂的选择
• 4.4.4 分步洗脱纯化熊果酸
• 5 讨论
• 6 结论
• 参考文献
• 致谢
• 作者简介