蔬菜中氨基甲酸酯类农药残留快速检测技术研究

论文摘要

氨基甲酸酯类农药因其品种多、药效好、对人畜低毒、高效、选择性强等特点而被广泛应用于农业生产中。随之带来的农产品中农药残留量超标问题也日益突出,直接影响着消费者的身体健康和对外经贸的发展。所以建立快速、高效、经济的检测方法成为亟待解决的问题。本文研究了目前最常用的两种氨基甲酸酯类农药残留快速检测方法——酶联免疫吸附分析法（ELISA法）和酶抑制电化学法。首先以克百威的碱解产物呋哺酚为原料,采用一种新的半抗原合成途径合成了克百威半抗原:2,3-二氢-2,2-二甲基-7-苯并呋喃基对硝基苯氯甲酸酯（BFNH）。将半抗原与牛血清蛋白（BSA）偶联制备了人工抗原BFNH-BSA,用所制备的人工抗原免疫动物,从血清中分离纯化获得了高效价、高特异性的克百威多克隆抗体。纯化后的抗体效价达到1.024×107,与5种结构相似的氨基甲酸酯类农药和3种有机磷农药的交叉反应率均低于9%。利用这种多克隆抗体建立了克百威ELISA检测技术并对实验条件进行了优化选择。最低检测限达10-7mg·mL-1,优化条件为:碳酸盐缓冲液为较优的包被介质;20min为最佳反应时间;甲醇含量10%以下,对免疫反应的影响较小。两种快速检测方法对同一批出口蔬菜样品的检测结果对比分析显示两种方法检测结果基本吻合:ELISA法检出克百威残留量超过0.5mg·kg-1的样品有10例,检出率5%;酶抑制电化学法检测结果中对乙酰胆碱酯酶抑制率超过60%的样品有7例,检出率3.5%。HPLC法验证结果与两种快速检测方法的检测结果也基本符合,表明两种快速检测方法的检测结果较为准确。ELISA法和酶抑制电化学法均适合对大量农产品中有机磷或氨基甲酸酯类农药残留超标与否进行快速筛查,但在实际应用中又各有其优缺点,若两种方法联合应用则可形成优势互补,极大地扩大农药残留的检测范围。ELISA法非常适合大批量样品的筛选,而且灵敏度、回收率都能满足检测要求,对于较易制得抗体的农药残留检测非常适用;对于较难得到抗体的农药残留检测,可用酶抑制电化学法替代,由本研究结果可知,酶抑制电化学法检测的灵敏度和准确度与ELISA法基本吻合,可满足农药残留快速检测要求。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 本文缩略语表
• 第一章 文献综述
• 1.1 引言
• 1.2 氨基甲酸酯类农药简介
• 1.2.1 氨基甲酸酯类农药的化学结构类型
• 1.2.2 氨基甲酸酯类农药的作用机制
• 1.2.3 氨基甲酸酯类农药使用和残留现状
• 1.3 氨基甲酸酯类农药残留的食品安全风险评估
• 1.3.1 食品安全概述
• 1.3.2 食品中的氨基甲酸酯类农药污染来源
• 1.3.3 氨基甲酸酯类农药残留的风险评估
• 1.4 氨基甲酸酯类农药残留分析方法
• 1.4.1 分光光度测定法
• 1.4.2 气相色谱法（GC）
• 1.4.3 高效液相色谱法（HPLC）
• 1.4.4 色-质联用（GC-MS,HPLC-MS）
• 1.4.5 荧光分析法（FA）
• 1.4.6 免疫分析法（IA）
• 1.4.7 生物传感器法
• 1.4.8 毛细管电泳法（CE）
• 1.4.9 酶抑制法（EI）
• 1.4.10 薄层色谱法（TLC）
• 1.5 本研究的目的和意义
• 第二章 ELISA法检测蔬菜中的克百威残留
• 2.1 引言
• 2.2 实验材料、试剂与仪器
• 2.2.1 实验材料
• 2.2.2 实验试剂
• 2.2.3 实验仪器
• 2.2.4 部分实验试剂的配制
• 2.3 实验方法
• 2.3.1 克百威人工半抗原的制备
• 2.3.2 克百威人工免疫抗原的制备
• 2.3.3 抗血清的制备
• 2.3.4 抗原抗体最佳工作浓度的确定
• 2.3.5 抗血清的纯化
• 2.3.6 纯化后的抗血清效价检测
• 2.3.7 抗血清的特异性检测
• 2.3.8 实验条件的优化
• 2.3.9 间接竞争ELISA标准曲线的建立
• 2.3.10 ELISA法检测样品中克百威残留
• 2.4 结果与分析
• 2.4.1 克百威半抗原的鉴定
• 2.4.2 人工抗原的鉴定
• 2.4.3 抗原抗体最佳工作浓度筛选
• 2.4.4 抗血清的纯化和效价测定
• 2.4.5 抗体特异性鉴定
• 2.4.6 实验条件的优化
• 2.4.7 间接竞争ELISA标准曲线的建立
• 2.4.8 ELISA法检测样品结果
• 2.5 讨论
• 第三章 酶抑制电化学法测定蔬菜中的氨基甲酸酯类农药残留
• 3.1 引言
• 3.2 实验材料、试剂与仪器
• 3.2.1 实验材料
• 3.2.2 实验试剂
• 3.2.3 实验仪器
• 3.3 实验方法
• 3.3.1 样品的前处理
• 3.3.2 分析前处理
• 3.4 结果与分析
• 3.4.1 抑制时间的优化
• 3.4.2 样品测定
• 3.5 讨论
• 小结
• 参考文献
• 硕士期间发表的论文
• 致谢
• 衷心感谢以下基金资助