论文摘要
低密度脂蛋白受体相关蛋白1B （low density lipoprotein receptor-related protein 1B,LRP1B）是低密度脂蛋白受体家族的成员。已有研究发现,LRP1B基因在许多人类肿瘤组织中失活,提示该基因是一个潜在的肿瘤抑制基因。进一步研究发现,LRP1B可调节uPA系统相关分子的代谢,而uPA系统与肿瘤细胞的侵袭与转移密切相关。因此,为阐明LRP1B基因与肿瘤转移的相关性,本研究以HEK 293细胞为材料应用RNAi技术特异地封闭LRP1B基因的表达,通过检测HEK293细胞生物学表型的变化来评价LRP1B基因作为候选的肿瘤抑制基因与肿瘤转移的相关性。LRP1B基因是一个转录本长达16.5kb的大转录本基因。根据高效siRNA序列特征和靶序列处的mRNA二级结构特点,本研究对LRP1B基因多达1100个的siRNA候选靶序列进行双重评价,最终在基因转录本的不同位置选取了6个siRNA靶位点。针对这些靶位点,本实验构建了6个表达shRNA的pSilencer4.1重组体,稳定转染HEK 293细胞并采用半定量RT-PCR检测各重组体的沉默效果。结果表明,本实验所构建的6个shRNA重组体中有5个对LRP1B基因形成了有效沉默（>50%）,并得到了多个完全封闭LRP1B基因表达的HEK 293细胞单克隆。这为后续的HEK 293细胞的生物表型分析提供了理想的材料。本研究通过绘制细胞生长曲线和软琼脂集落形成实验研究了LRP1B基因沉默后HEK 293细胞生长特性的改变。结果发现,虽然封闭LRP1B基因的表达后HEK 293细胞的生长曲线并未发生明显变化,但在软琼脂中形成的集落却有明显变大、增多的趋势,说明LRP1B具有抑制HEK 293细胞非锚定依赖性生长的功能。本研究又通过Transwell侵袭小室实验、细胞趋化性实验研究了HEK 293细胞侵袭和趋化性运动能力的改变。结果发现,封闭LRP1B基因的表达增强了HEK 293细胞的侵袭和趋化性运动能力,并且增强的程度与LRP1B的基因表达封闭水平呈正相关。这说明,LRP1B基因具有抑制HEK 293细胞侵袭与转移的功能。总之,通过本研究表明,LRP1B基因作为一个候选肿瘤抑制基因具有抑制肿瘤细胞恶性转化和转移的功能。
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相关论文文献
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