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三叶木通有效成分含量测定及指纹图谱研究

2020-12-06阅读(299)

三叶木通有效成分含量测定及指纹图谱研究

论文摘要

三叶木通Akebia trifoliata （Thunb.） Koidz,为木通科木通属落叶木质藤本植物。其干燥藤茎作为中药木通入药,历史悠久。药理研究证明,三叶木通中的药用有效成分主要为常春藤皂苷元和齐墩果酸,在利尿抗水肿、抗菌消炎、抑制肿瘤细胞生长、保肝、降酶、提高机体免疫力等多方面均具有潜在的开发应用价值。本论文主要通过对三叶木通种质资源的调查,以高效液相色谱（HPLC）为主要分析手段,测定了不同产地、不同种质、不同生长年限、不同生长部位的三叶木通中的有效成分含量,并结合指纹图谱研究以期建立三叶木通药材质量的综合评价方法,为三叶木通的规范化种植和可持续发展提供依据。实验的主要结果如下：1.建立了三叶木通中三萜皂苷元（常春藤皂苷元、齐墩果酸）类物质的提取和含量测定方法。提取方法采用以甲醇为溶媒的超声提取法；含量测定用HPLC法,色谱条件为：流动相A：按照水-冰醋酸-三乙胺（1：0.04：0.02；v：v：v）配制成的缓冲溶液,B：乙腈,梯度洗脱0min:A-B（40:60）,10min:A-B（30:70）,20min:A-B（24:76）,35min:A-B（24:76）;检测波长210nm；流速0.8ml.min-1；柱温25℃。结果表明该方法精密度高、重现性好,可作为三叶木通中常春藤皂苷元和齐墩果酸的检测手段。2.以全国不同产地、不同种质的三叶木通为材料,采用HPLC法测定了其中常春藤皂苷元和齐墩果酸的含量。结果表明同一产地的不同样品及各不同产地样品之间有效成分含量均存在较大差异。其有效成分总含量由高到低依次为河南、陕西、山西、贵州、甘肃、湖北、湖南。3.分析了相同生长环境下,不同生长年限的三叶木通中有效成分的含量变化趋势。综合考虑三叶木通资源的可持续利用兼顾实际生产中的综合效益,确定了三叶木通藤茎的最佳采收年限应为栽种后的第六年。4.比较了相同生长环境下,三叶木通各生长部位中有效成分的含量变化。结果显示齐墩果酸的含量由高到低依次为根>25-27年生藤茎>18-20年生藤茎>8-10年生藤茎>1-2年生藤茎>叶片>种子>果皮>果肉；常春藤皂苷元的含量由高到低依次为果皮>种子>1-2年生藤茎>叶片>18-20年生藤茎>8-10年生藤茎>25-27年生藤茎>根>果肉；总含量由高到低依次为果皮>种子>根>25-27年生藤茎>18-20年生藤茎>1-2年生藤茎>8-10年生藤茎>叶片>果肉。这为三叶木通药用资源的开发利用提供了有力的理论依据。5.初步研究了三叶木通近成熟果实中药预知子的HPLC色谱指纹图谱研究方法：以75%甲醇为提取溶媒,采用超声提取法制备样品溶液。色谱条件为：乙腈-水梯度洗脱；检测波长为215nm；流速1.0ml.min-1；柱温35℃。该方法所得指纹图谱稳定性好、响应峰多、吸收强、特征明显,所测组分均达到基线分离,可作为建立预知子指纹图谱研究方法的理论参考。6.分别以全国7个省份、9个产区的预知子为材料,对不同供试品所得指纹图谱进行分析,共标定了8个特征峰。将样品色谱图与对照品色谱图进行比对,可确定7号峰、8号峰分别为常春藤皂苷元和齐墩果酸。指纹图谱相似度采用国家药典委员会开发的《中药色谱指纹图谱相似度评价系统研究版（2004A）》进行计算。全国7个省份、9个产区的预知子样品平均相似度为0.768,由此可见全国不同产地的预知子药材,其HPLC指纹图谱差异较大,相似度较低,还不能完全作为中药预知子的特征指纹,只能为建立完善的预知子特征指纹图谱提供一定的理论参考。

论文目录

  • 摘要
  • Abstract
  • 第一章 文献综述
  • 1.1 三叶木通研究概况
  • 1.1.1 三叶木通的本草考证
  • 1.1.2 木通入药的历史变迁
  • 1.1.3 中药木通的鉴别
  • 1.1.4 三叶木通的植物学形态和生物学特性
  • 1.1.5 三叶木通的化学成分概述
  • 1.1.6 三叶木通的药理作用及临床应用进展
  • 1.2 色谱技术在中药分析中的应用
  • 1.2.1 色谱技术的发展
  • 1.2.2 色谱技术在中药分析领域中的应用现状
  • 1.3 中药现代化、中药质量控制及中药材规范化种植三者间的关系
  • 1.3.1 中药现代化
  • 1.3.2 中药材质量控制研究现状
  • 1.3.3 中药材规范化种植是中药现代化及中药质量控制的基础
  • 1.4 研究内容、目的、意义
  • 第二章 三叶木通有效成分提取及测定方法研究
  • 2.1 三叶木通有效成分的提取方法研究
  • 2.1.1 材料与仪器
  • 2.1.2 提取方法的选择
  • 2.1.3 提取条件的优化
  • 2.1.4 最佳提取工艺的确定
  • 2.2 采用HPLC法对三叶木通进行含量测定
  • 2.2.1 标准品的配置
  • 2.2.2 方法学考察
  • 2.2.3 标准曲线的制定
  • 2.2.4 色谱条件的确定
  • 2.2.5 样品制备及测定
  • 第三章 不同产地三叶木通藤茎的含量研究
  • 3.1 三叶木通资源收集
  • 3.1.1 收集调查内容
  • 3.1.2 收集调查方法
  • 3.1.3 收集调查结果
  • 3.2 不同产地三叶木通藤茎有效成分提取及测定
  • 3.2.1 材料预处理
  • 3.2.2 有效成分提取
  • 3.2.3 HPLC法测定
  • 3.3 结果与分析
  • 3.4 讨论
  • 3.4.1 不同产地三叶木通有效成分含量差异
  • 3.4.2 不同产地三叶木通中有效成分含量分析
  • 第四章 三叶木通最佳采收年限的确定
  • 4.1 不同生长年龄的三叶木通藤茎采集
  • 4.2 有效成分提取及测定
  • 4.2.1 材料预处理
  • 4.2.2 有效成分提取
  • 4.2.3 HPLC法测定
  • 4.3 结果与分析
  • 4.4 讨论
  • 第五章 三叶木通不同生长部位含量的比较研究
  • 5.1 试验材料的收集
  • 5.2 有效成分提取及测定
  • 5.2.1 材料预处理
  • 5.2.2 有效成分提取
  • 5.2.3 HPLC法测定
  • 5.3 结果与分析
  • 5.4 讨论
  • 第六章 预知子HPLC指纹图谱研究
  • 6.1 中药预知子的基源考证
  • 6.2 预知子指纹图谱研究现状
  • 6.3 预知子HPLC指纹图谱条件确定
  • 6.3.1 色谱条件
  • 6.3.2 对照品溶液制备
  • 6.3.3 供试品溶液制备
  • 6.4 方法学考察
  • 6.4.1 精密度试验
  • 6.4.2 重复性试验
  • 6.4.3 稳定性试验
  • 6.5 预知子样品测定
  • 6.5.1 图谱测定时间的确定
  • 6.5.2 空白试验
  • 6.5.3 样品指纹图谱测定
  • 6.6 指纹图谱建立与分析
  • 6.6.1 共有峰的确定
  • 6.6.2 相似度计算
  • 6.6.3 样品指纹图谱分析
  • 总结
  • 参考文献
  • 致谢
  • 攻读学位期间的研究成果

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