羟基丁酸—羟基辛酸聚合物/胶原骨软骨一体化支架制备及其细胞亲和性的检测

论文摘要

组织工程技术出现于上世纪80年代，它的出现标志着由器官移植迈入了器官再造的新时代。软骨组织工程作为组织工程的重要分支，近年来取得了很大发展，已经由单纯的软骨修复转变为骨与软骨下骨的一体化修复，因而有必要研发出骨软骨一体化支架。本文首次采用羟基丁酸-羟基辛酸聚合物（PHBHOx）为主体材料，复合Ⅰ型胶原，运用溶剂浇铸-颗粒沥滤法，制备骨软骨一体化支架，并对支架的各种性能进行检测和评估，以期制备出符合骨软骨组织工程要求的支架，为利用组织工程技术修复软骨损伤奠定基础。我们首先将PHBHOx溶于氯仿，然后按质量比2%（胶原/PHBHOx）的比例加入Ⅰ型胶原，充分搅拌均匀后，加入一定量100μm的Nacl颗粒，搅匀后加入模具中，挤压成型，作为软骨相；待其半干时，以PHBHOx、胶原、200μmNacl颗粒为原料，按前述步骤制备骨相。待溶剂挥发后，通过颗粒沥滤除去盐粒，干燥后作为实验组。对照组不含胶原，制备方法如前。之后，对所制备的支架进行孔径、孔隙率等性能检测。分离、培养兔骨髓间充质干细胞（BMSCs），选取第2代接种于支架上，进行支架-细胞体外复合培养支架，培养至第5天时，通过扫描电镜观察细胞在支架上的黏附情况；分别在第2、4、6、8天时，MTT比色法评价细胞在支架的增殖情况，并对检测结果进行分析。研究结果显示，一体化支架软骨层孔径80-100μm，孔隙率90%；骨层孔径200-220μm，孔隙率70%；整体支架孔隙率（80±2.3）%，符合软骨组织工程的要求。采用密度梯度离心法分离BMSCs，操作简便，细胞成活率高，是一种较为可靠的种子细胞培养方法。BMSCs与支架复合培养后，扫描电镜观察到细胞在支架上黏附紧密；MTT法证实细胞在复合支架上增殖较快、状态良好。上述研究结果表明，以羟基丁酸-羟基辛酸聚合物为主体材料，复合Ⅰ型胶原构建的一体化支架各项性能基本复合软骨组织工程对支架的要求，有望用于骨软骨组织工程修复。

论文目录

• 摘要
• 英文摘要
• 第一章 前言
• 1.组织工程的建立
• 2.软骨组织工程
• 2.1 软骨组织工程支架材料
• 2.2 软骨组织工程支架制备技术
• 3. 骨软骨一体化组织工程支架制备情况
• 本文研究目的
• 第二章 PHBHOx/HA 多孔支架的制备
• 1. 材料和方法
• 1.1 主要试剂与仪器
• 1.2 PHBHOx/胶原一体化支架的制备
• 1.3 结果
• 1.4 讨论
• 本章小结
• 第三章 兔骨髓间充质干细胞（BMSCs）的分离、培养
• 1. 材料和方法
• 1.1 主要试剂与仪器
• 1.2 实验动物
• 1.3 BMSCs 原代培养（密度梯度离心法结合贴壁培养法）
• 1.4 骨髓间充质干细胞原代、第一、二、三代细胞活性的比较
• 1.5 统计学处理
• 2 结果
• 2.1 骨髓间充质干细胞显微镜下观察
• 2.2 原代、第一、二、三代细胞活性的比较
• 3 讨论
• 本章小结
• 第四章 细胞-支架复合体培养
• 1 材料和方法
• 1.1 主要试剂与仪器
• 1.2 支架细胞体外复合培养
• 1.3 MTT 法检测细胞在支架上的增殖活性
• 1.4 统计学处理
• 2 结果
• 2.1 细胞-支架复合体电镜下观察
• 2.2 细胞在支架上增殖的 MTT 法检测
• 3 讨论
• 本章小结
• 结论
• 参考文献
• 综述
• 参考文献
• 附录
• 个人简介
• 致谢