毛细管电泳法检测单细胞内髓过氧化物酶在急性白血病分型诊断中的应用

论文摘要

目的:应用毛细管电泳法从单细胞水平连续检测不同类型急性白血病中髓过氧化物酶（MPO）表达的差异,探讨单细胞水平MPO表达的检测在急性白血病分型诊断中的意义。 方法:（1） 标本获取及分组:收集51例急性白血病（AL）患者及30例健康对照者骨髓或外周血用Ficoll-hypaque梯度离心法分离出单个核细胞。51例AL患者（男28例,女23例,年龄14～70岁）,按FAB分型分为急性淋巴细胞白血病（ALL）与急性非淋巴细胞白血病（ANLL）。ALL组15例,ANLL36例,骨髓或外周血中幼稚细胞比例均大于60%。健康对照者30例（男17例,女13例,年龄22～34岁）,均为健康体检者。（2） 实验原理:首先利用毛地黄皂苷（Dig）能溶解细胞膜上胆固醇的性质,使细胞膜上形成微孔,只有小分子物质（如酶的底物和产物）可以通过这些微孔进出细胞,而大分子物质（如酶）则不能穿过细胞膜。在毛细管中加入缓冲液和MPO反应的底物氢醌（H2Q）和过氧化氢（H2O2）。用压力连续驱动蚀孔后的活细胞在毛细管内在线进行细胞内酶催化反应,在毛细管出口端用电化学方法检测从细胞内扩散出来的酶催化反应产物笨醌（BQ）,从而在流出曲线上得到对应于每个活细胞内MPO的峰。最后通过毛细管电泳毛细管内催化反应的方法测定细胞提取液中MPO的活度而对连续电化学检测单细胞中的MPO进行定量。 结果:30例健康对照者所测得MPO值的数量级在10-10～10-9之间;15例ALL患者中8例的MPO值为0,4例数量级在10-11～1012之间,考虑为粒细胞污染所致,另有3例的数量级较高,结合免疫分型和RT-PCR证实为急性混合性白血病;36例ANLL患者亚型不同,所测得的MPO值差别较大,数量级在10-10～10-7之间。M3病例的MPO平均值最高,与其它4组比较差异有统计学意义;M2、M4其次,两者之间差异无统计学意义（P>0.05）,但与其它3组比较差异有统计学意义(P

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