抗麻痹性贝毒素GTX2，3单克隆抗体的制备及特性分析

论文摘要

目的:建立抗麻痹性贝毒素GTX2,3单克隆抗体杂交瘤细胞系,制备抗GTX2,3单克隆抗体,并鉴定其免疫学特性。 方法:利用醛化法将GTX2,3与载体牛血清白蛋白（BSA）偶联,制备完全抗原。以GTX2,3-BSA免疫小鼠,应用杂交瘤技术建立分泌抗GTX2,3单克隆抗体的杂交瘤细胞株。GTX2,3与钥孔血蓝蛋白（KLH）偶联作为检测抗原,用间接ELISA法筛选阳性克隆株。用体内诱生腹水法生产GTX2,3腹水型单克隆抗体。对所得阳性杂交瘤细胞作染色体分析并对单克隆抗体进行特性分析。 结果:获得三株稳定分泌抗GTX2,3单克隆抗体的杂交瘤细胞株E9:F4、E9:F10、E9:G9。间接ELISA法检测E9:F10细胞株腹水抗体效价为1.4×10-5。 结论:醛化法能使毒素GTX2,3与载体蛋白偶联。半抗原GTX2,3与载体蛋白偶联后作为免疫原,可制备抗GTX2,3抗血清和单克隆抗体。

论文目录

• 英文缩略词表
• 中文摘要
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• 第一部分 前言
• 1.1 赤潮及赤潮危害
• 1.2 麻痹性贝毒
• 1.3 目前检测毒素的方法
• 1.4 单克隆抗体
• 1.5 本实验研究思路及技术路线
• 第二部分 材料与方法
• 2.1 实验材料
• 2.1.1 主要仪器设备
• 2.1.2 主要试剂
• 2.1.3 主要试剂配制方法
• 2.2 实验方法
• 2.2.1 反相高效液相色谱法分析毒素
• 2.2.2 完全抗原GTX2,3-BSA的制备
• 2.2.3 免疫小鼠
• 2.2.4 采集、保存及检测抗血清
• 2.2.5 饲养细胞的制备
• 2.2.6 细胞融合
• 2.2.7 反相间接血凝法初步筛选阳性孔
• 2.2.8 间接ELISA法检测培养上清及腹水
• 2.2.9 单克隆抗体特异性分析
• 2.2.10 有限稀释法克隆化
• 2.2.11 杂交瘤细胞染色体分析
• 2.2.12 杂交瘤细胞的冻存及复苏
• 2.2.13 腹水型单克隆抗体的制备及检测
• 第三部分 结果
• 3.1 反相高效液相色谱法分析毒素结果图
• 3.2 检测抗血清
• 3.3 融合克隆率
• 3.4 细胞融合后阳性细胞株的筛选
• 3.5 有限稀释法克隆化
• 3.6 单克隆抗体特异性分析
• 3.7 杂交瘤细胞染色体分析图
• 3.8 腹水型单克隆抗体的效价检测
• 第四部分 讨论
• 4.1 GTX2,3与载体的偶联
• 4.1.1 反相高效液相色谱法分析毒素
• 4.1.2 完全抗原GTX2,3-BSA的制备
• 4.2 抗血清的制备
• 4.3 杂交瘤的制备
• 4.4 单克隆抗体特异性分析
• 4.5 杂交瘤的克隆化及冻存和复苏
• 4.6 腹水型单克隆抗体的生产与纯化
• 展望
• 参考文献
• 致谢