冰草P基因组特异DNA重复序列的克隆及应用

论文摘要

本研究以冰草及小麦族其它基因组植物为材料,进行冰草P 基因组特异重复序列分离研究,并将RAPD 和ISSR 标记转化为SCAR 标记,用于小麦-冰草重组系外源染色质的鉴定。获得的主要成果如下: 1.利用回收特异RAPD 片段的方法,对小麦族部分基因组植物进行了RAPD 筛选,回收了部分特异片段,分离到一个冰草P 基因组特异DNA重复序列——OPC08578,该序列长578bp,G+C 含量为44%,与Genbank上注册的2,587,412 个序列（GenBank+EMBL+PDB）同源比较表明,该序列是冰草P 基因组新的特异DNA 重复序列。以OPC08578克隆作探针,对部分小麦族植物的DNA 做Southern 杂交,结果表明,该克隆片段在W、H 和F 基因组也有分布,在ABD、R、V、E、St、Ns、I、D、A 等基因组中则无分布,证明OPC08578 是P 基因组特异性很强的DNA 重复序列。2.根据OPC08578 序列,设计合成了一对特异引物SC-OPC08。该标记不仅可以用来区别P 与ABD、R、V、E、St 、W 、Ns、D、A、C、S、U、I、M、AG 基因组,而且可以用于小麦-冰草附加系中冰草染色质的检测,PCR 扩增结果和Southern 杂交结果相吻合。这样我们将RAPD 标记转化为了稳定性好的SCAR 标记。3.利用回收特异ISSR 片段的方法,对小麦族部分基因组植物进行了ISSR 筛选,回收了部分特异片段,分离到一个冰草P 基因组特异DNA 重复序列——UBC811535,该序列长535bp,G+C 含量为44%,与Genbank上已注册的2,587,412 个序列（GenBank+EMBL+PDB）同源比较表明,该序列是P 基因组新的特异重复序列。以UBC811535克隆作探针,对部分小麦族植物的DNA 做Southern 杂交,

论文目录

• 符号说明
• 摘要
• Abstract
• 1 引言
• 1.1 重复序列的种类、功能、应用和分离
• 1.1.1 重复序列的种类与特征
• 1.1.2 重复序列的功能
• 1.1.3 重复序列的应用
• 1.1.4 特异重复序列的分离方法
• 1.2 小麦族重复序列研究概况
• 1.2.1 小麦属
• 1.2.2 黑麦属
• 1.2.3 大麦属
• 1.2.4 山羊草属
• 1.2.5 小麦族其它植物
• 1.3 P 基因组重复序列研究现状
• 1.4 本研究的目的意义
• 2 材料与方法
• 2.1 试验材料
• 2.2 试验设计
• 2.3 研究方法
• 2.3.1 基因组总DNA 的提取
• 2.3.2 RAPD 分析
• 2.3.3 ISSR 分析
• 2.3.5 电泳
• 2.3.6 基因组特异片段的回收、克隆
• 2.3.8 SCAR-PCR 分析
• 3 结果与分析
• 3.1 RAPD 扩增产物的特异重复序列克隆及应用
• 3.1.1 P 基因组特异片段的RAPD 筛选
• 3.1.2 P 基因组特异片段的回收、克隆
• 3.1.3 特异 DNA 片段在基因组的分布
• 3.1.4 序列分析
• 3.1.5 SCAR 标记的建立
• 3.2 ISSR 扩增产物的特异重复序列克隆及应用
• 3.2.1 特异片断筛选
• 3.2.2 P 基因组特异片断的回收、克隆
• 3.2.3 特异 DNA 片段在基因组的分布
• 3.2.4 序列分析
• 3.2.5 SCAR 标记的建立
• 4 讨论
• 4.1 基因组特异重复序列分离方法比较
• 4.2 基因组演化关系
• 4.3 基因组特异重复序列的应用
• 5 结论
• 参考文献
• 致谢
• 研究生期间发表的论文