中药当归等诱导K562细胞凋亡及抗耐药机制研究

论文摘要

目的:课题研究中药复方当归注射液、马钱子碱、士的宁诱导白血病细胞凋亡的作用,探讨该类中药抗白血病多药耐药的作用机制,为研究中药耐药逆转剂提供理论依据。研究对象:白血病K562/S、K562/A02细胞。方法:采用噻唑蓝（MTT）法检测依托泊苷（etoposide,VP16）的细胞毒作用。运用流式细胞术检测中药复方当归注射液等非细胞毒性剂量单用及与VP16联用作用于白血病细胞K562/S和K562/A02不同时间后凋亡率的变化。用Western-blot法检测药物作用不同时间、细胞凋亡前后bcl-2蛋白表达变化。结果:1、VP16对K562/S和K562/A02细胞增殖有一定影响,且呈浓度依赖性。为避免大剂量的诱导剂对细胞的杀伤作用而非诱导其凋亡,实验选用IC50前的浓度即1μg.ml-1和40μg.ml-1的VP16分别作用于K562/S和K562/A02细胞。2、中药复方当归注射液、马钱子碱、士的宁在非细胞毒性剂量时,分别作用K562/A02细胞24、48、72小时,其凋亡率随作用时间的延长有所增加,72小时复方当归注射液组与阴性对照组比较有显著差异（P<0.05）。三种中药与VP16 40μg.ml-1联用后,诱导细胞凋亡率明显增加,且呈一定的时间依赖性。3、复方当归注射液、马钱子碱、士的宁在非细胞毒性剂量时,分别作用K562/A02细胞24、48、72小时,对bcl-2蛋白表达影响不明显,但与VP16 40μg.ml-1联用后,可使其表达呈不同程度的下降,其中以复方当归注射液组最明显,且呈时间依赖性。4、三种中药可促进VP16诱导白血病细胞凋亡,下调bcl-2蛋白表达,是其逆转白血病细胞多药耐药作用机制之一。结论:1、中药复方当归注射液、马钱子碱、士的宁可部分逆转白血病细胞的多药耐药性。2、复方当归注射液、马钱子碱、士的宁逆转多药耐药机制与其通过下调抗凋亡蛋白bcl-2的表达,促进化疗药VP16诱导耐药细胞凋亡有关。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 符号说明
• 前言
• 第一部分 依托泊苷对 K562/S 及 K562/A02 的细胞毒性作用
• 1. 材料与方法
• 2.结果
• 3.结论
• 第二部分 三种中药单用及与依托箔苷联用诱导白血病细胞凋亡
• 1.材料与方法
• 2. 结果
• 3、结论
• 第三部分 三种中药单用及与依托箔苷联用作用 K562/A02 细胞 bcl-2 蛋白表达的变化
• 1.材料与方法
• 2、统计方法
• 3. 结果
• 4.结论
• 讨论
• 结论
• 参考文献
• 综述
• 致谢
• 在读期间发表论文