论文摘要
基因表达的终产物是RNA和蛋白质或多肽,要得到大量纯化的目的蛋白质产物,需构建一种能高水平表达外源基因的载体。启动子是表达载体的一个重要元件,它是影响mRNA分子合成速率的主要因素之一,筛选和研究强启动子是表达载体高水平表达外源基因的需要。本研究以地衣芽胞杆菌为出发菌,构建了地衣芽孢杆菌部分基因组文库,运用鸟枪打靶的方法以穿梭载体为探针从中分离了一个强启动子pB9。该启动子可在枯草杆菌表达系统中高效转录,其可作为构建枯草杆菌表达系统的重要组成元件。主要试验结果如下:（1）筛选并直接应用了发酵液低温离心后的上清液样品与蛋白上样缓冲液以1:1比例混合的方法,再按照SDS-PAGE聚丙烯凝胶电泳规定的步骤对试验进行处理和操作,取得了较为满意的SDS-PAGE聚丙烯凝胶电泳图;（2）筛选出了转录活性强的启动子。构建出了地衣芽胞杆菌基因组的部分基因组文库,并成功的运用鸟枪打靶的方法应用启动子探针载体克隆出了一批具有强转录活性的启动子,经酶切鉴定分析这些启动子为载体片段大小正确,是携带有插入片段符合要求的启动子。并将在宿主大肠杆菌DH5α中具有最高转录活性的启动子命名为pB9,将该启动子电转化进入枯草杆菌以后,通过测定强启动子pB948小时酶活曲线,用本实验室保存的麦芽糖诱导型的pGlv启动子与其作比较,证明该启动子pB9具有很强的转录活性;（3）强启动子pB9为正确地来源于地衣芽孢杆菌的启动子。通过对强启动子pB9核酸序列组成进行测定并与地衣芽孢杆菌基因组DNA序列进行了对比,表明强启动子pB9来源于地衣芽孢杆菌LuxS基因,为来源正确的启动子;（4） pB9具有典型的原核生物启动子的结构特征和很强的转录活性。应用启动子预测软件预测与分析,找到了其功能元件的位置,表明pB9具有典型的原核生物启动子结构。