腺病毒介导的成纤维细胞分泌内皮抑素联合顺铂对恶性黑色素瘤作用的实验研究

论文摘要

目的:对血管形成进行干涉是肿瘤临床治疗的有效手段。1997年,MichaelS.O’Reilly博士从肿瘤老鼠的尿中发现了Endostatin,命名为内皮抑素。研究显示内皮抑素可多靶点发挥抗血管生成作用,从而导致肿瘤的休眠及退缩。但内皮抑素性质不稳定,易失活,难以大量制备;且需每日给药,较为繁琐。解决上述困难较好的办法就是采取基因治疗的方法。利用腺病毒载体介导内皮抑素的方法成为了研究的热点。为了保证腺病毒介导的内皮抑素高效表达,我们将已构建成功的人分泌性内皮抑素腺病毒载体转染成纤维细胞,使其分泌有活性的内皮抑素。体外实验表明感染重组腺病毒后的成纤维细胞表达分泌的内皮抑素能抑制血管内皮细胞(ECV304)的增殖。本研究的目的是(1)测定腺病毒介导的成纤维细胞体内分泌内皮抑素的水平;(2)观察腺病毒介导的成纤维细胞分泌内皮抑素联合顺铂对B16恶性黑色素瘤裸鼠移植瘤生长的影响。方法:(1)以表达人内皮抑素的重组腺病毒感染成纤维细胞,用酶联免疫吸附法(ELISA)对感染后的成纤维细胞体内及体外分泌内皮抑素的水平进行测定。(2)用B16恶性黑色素瘤细胞株建立裸鼠的肿瘤移植模型,随机分组并设立对照,分别予人内皮抑素重组腺病毒感染的成纤维细胞、人内皮抑素重组腺病毒、顺铂、重组人内皮抑素、人内皮抑素重组腺病毒感染的成纤维细胞联合顺铂、重组人内皮抑素联合顺铂及转染空载体的腺病毒感染的成纤维细胞进行干预,计算肿瘤体积及抑瘤率,免疫组化法测微血管密度(MVD)及瘤体VEGF的表达。数据采用SPSS10.0软件进行统计分析。结果:(1)注射人内皮抑素重组腺病毒感染后的成纤维细胞24小时后,小鼠体内的内皮抑素水平即升至113.4ng╱ml,直到第六天浓度恢复至注射前水平。(2)在裸鼠的恶性黑色素瘤移植模型上,与对照组的裸鼠比较,注射人内皮抑素重组腺病毒感染的成纤维细胞组、人内皮抑素重组腺病毒组、顺铂组、重组人内皮抑素组、人内皮抑素重组腺病毒感染的成纤维细胞联合顺铂组及重组人内皮抑素联合顺铂组的抑瘤率分别为53.41%、35.06%、45.72%、17.52%、84.64%和59.40%,肿瘤的生长明显受到抑制(p＜0.05)。感染的成纤维细胞组肿瘤体积与重组腺病毒组、重组人内皮抑素组相比减小(p＜0.05)。各联合组的肿瘤生长受抑与顺铂组间有统计学差异(p＜0.05)。免疫组化结果显示对照组肿瘤的微血管密度及VEGF的表达最高,与其它各组之间均有统计学差异(p＜0.05),感染的成纤维细胞组肿瘤的微血管密度与重组腺病毒组、重组人内皮抑素组相比降低(p＜0.05)。各联合组的微血管密度及VEGF的表达均低于顺铂组(p＜0.05)。结论:感染了人内皮抑素重组腺病毒的成纤维细胞注射后,在小鼠体内能长时间及稳定有效地表达内皮抑素,并有效地抑制恶性黑色素瘤的生长,优于直接注射人内皮抑素重组腺病毒及重组人内皮抑素,且与顺铂有协同作用。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 前言
• 材料与方法、结果
• 分析与讨论
• 小结
• 参考文献
• 附图
• 致谢
• 综述及参考文献