葡萄籽原花青素制备工艺及真菌毒素检测

论文摘要

本文以葡萄籽为原料,研究原花青素的制备工艺及葡萄籽和提取物中真菌毒素的分析测定方法。采用罐组式逆流提取法对葡萄籽进行提取。分别以水和乙醇为提取溶剂,经正交实验得到最佳工艺条件。以水为溶剂时采用整粒葡萄籽,料液比（g：mL）1：3,提取温度100℃,提取级数四级,提取时间40min/级；与单罐水提取法相比,动态罐组式逆流法的提取率略有提高,提取时间减少33%,单位药材的溶剂消耗量减少75%。以乙醇为溶剂时采用葡萄籽粗粉（20目）,55%（v/v）乙醇,料液比（g：mL）1：6,提取温度75℃,提取级数3级,提取时间30min/级。与单罐乙醇回流提取法相比,本法提取率基本相同,提取温度降低11.8%,提取时间缩短25%,单位药材的溶剂消耗量减少44%。以上研究表明,与常规提取法相比,罐组式逆流提取法能获取较高的提取率,同时大大减少提取溶剂用量,缩短提取时间,是一种高效节能的提取方法。选用AB-8大孔树脂对葡萄籽提取液进行纯化。工艺路线如下：上样液浓度为8.28 mg mL-1,流速为2BVh-1,上样6 BV。以4 BV h-1的流速水洗4BV去除大部分非原花青素成分,根据生产需要可采用两种洗脱方式：（1）20%乙醇以2BV/h的流速洗脱4 BV,再用40%乙醇以2 BV h-1的流速洗脱4BV,收集洗脱液,减压浓缩,冷冻干燥。（2）直接用40%乙醇以2 BV h-1的流速洗脱4 BV,收集洗脱液,减压浓缩,冷冻干燥。树脂柱清洗,重复使用。应用近红外透射光谱分析技术,建立葡萄籽提取物大孔树脂纯化过程的定量测定模型,实时监测葡萄籽多酚洗脱过程浓度的动态变化。模型采用偏最小二乘法（PLS）,9个主因子,相关系数R2达到0.9995,RMSEC为0.713,RSEC为2.39%。与传统方法（比色法）相比,采用本方法可以在20 s进行一次测定,而比色法需要2 h以上。该方法能快速、无损、有效地测定大孔树脂洗脱液中多酚的浓度,对生产过程进行质量控制。采用13C17-AFB1同位素内标,首次建立了同时测定葡萄籽（包括皮和梗）中AFB1、AFB2、MPA和STC的UHPLC-MS法。方法学研究表明,该方法简便、准确,能在4 min内将4种真菌毒素完全分离并准确测定,可用于葡萄籽中AFB1、AFB2、MPA和STC等4种真菌毒素的分析测定。采用13C20-OTA同位素内标,建立了测定葡萄籽及其提取物原花青素中OTA的UHPLC-MS法,该方法简便、准确,可用于葡萄籽及其提取物原花青素中OTA的分析测定。在此基础上,研究了OTA在葡萄籽提取及大孔树脂纯化过程的转移与残留,结果表明,采用水及乙醇为提取溶剂,葡萄籽中的OTA均会转移入提取液,平均转移率分别为18.9%和24.5%,醇提法转移率高于水提法。含OTA的提取液经AB-8大孔树脂纯化,OTA的平均残留率为9.25%,表明大孔树脂在富集纯化葡萄籽原花青素的同时,能出去提取液中近90%的OTA,是一种值得推广的纯化方法。

论文目录

• 中文摘要
• ABSTRACT
• 1 绪论
• 1.1 概述
• 1.2 原花青素提取
• 1.3 原花青素纯化
• 1.4 近红外光谱分析技术
• 1.5 真菌毒素
• 1.6 本文研究内容与目标
• 2 葡萄籽原花青素提取工艺
• 2.1 前言
• 2.2 实验部分
• 2.3 结果与讨论
• 2.4 总结
• 3 葡萄籽原花青素大孔树脂纯化
• 3.1 引言
• 3.2 仪器与试剂
• 3.3 方法、结果与讨论
• 3.4 总结
• 4 葡萄籽多酚纯化过程的近红外光谱快速检测
• 4.1 引言
• 4.2 仪器与试剂
• 4.3 实验方法
• 4.4 结果与讨论
• 4.5 总结
• 5 葡萄籽中真菌毒素的检测
• 5.1 引言
• 5.2 实验方法
• 5.3 结果与讨论
• 5.4 总结
• 6 葡萄籽原花青素制备过程赭曲霉素A的转移与残留
• 6.1 引言
• 6.2 实验方法
• 6.3 结果与讨论
• 6.4 总结
• 7 总结和展望
• 7.1 总结
• 7.2 展望
• 参考文献
• 作者简历及在读期间所取得的科研成果