新城疫病毒的分离鉴定和免疫组化法检测的研究

论文摘要

新城疫（Newcastle disease,ND）是鸡的一种高度接触性、毁灭性的传染病,给我国的养禽业造成巨大的经济损失,因此被国际兽医局（Office InternationaldesEpizooties,OIE）列为必须通报的传染病之一。在安徽地区随着疫苗的广泛应用,ND大规模爆发流行己受到明显控制,但由于疫苗质量、使用方法、免疫程序等问题,导致了非典型ND的广泛发生;而新城疫病毒（Newcastle disease vires,NDV）宿主范围的不断扩大和变异毒株的出现和流行,都使ND的防制和诊断工作更加复杂,引起社会各行对NDV检测和防治高度重视。首先,从临床上收集到的具有典型和非典型ND临床症状的病料组织20份,组织为脑。采用SPF鸡胚分离、纯化病毒,用HA与HI进行病毒尿囊液的初步鉴定。结果鉴定出三株新城疫病毒,分别命名为NDV-AH1、NDV-AH2、NDV-AH3。其次,利用NDV-AH1、NDV-AH2、NDV-AH3制备成免疫原,免疫7日龄的非免疫雏鸡,免疫3次后采血,分离血清,用微量法在同一个条件下用不同的分离毒株和Lasota疫苗株做为抗原做交互血凝抑制试验,测定免疫血清的HI抗体滴度,检测这三株分离毒分别与Lasota疫苗株抗原相关性,计算出R值比较其抗原相关性的差异。结果表明:三个毒株的R值为:NDV-AH1毒株与Lasota株两者间的抗原性差异R=0.90,NDV-AH2与Lasota两毒株间的抗原性差异R=0.95,NDV-AH3与Lasota两毒株间的抗原性差异R=0.91。当R值在0.67≤R≤1.5之间,说明分离毒株与Lasota毒株抗原性无明显差异。由此可知NDV-AH1、NDV-AH2、NDV-AH3与Lasota疫苗株之间抗原性无明显差异。为以后这些地区接种ND疫苗提供试验依据。再者,试验还建立了F48E9强毒株感染的PCEF细胞,观察细胞病变,用病变细胞进行免疫组化检测一抗和二抗最适试验浓度条件的优化,经过优化试验得出,一抗以1:10倍稀释,37℃孵化1h,酶标二抗以1:400稀释时,孵育时间为37℃,40min,染色效果达到最佳状态,具有染色效果好,背景清晰的优点。最后,进一步用所建立免疫组化的方法来检测F48E9强毒株和NDV-AH1毒株分别人工感染7日龄的非免疫雏鸡,取感染后3-4天的鸡全部扑杀,采集脑,肺,肝脏,脾脏,胰脏,十二指肠,气管来观察这些组织中的F48E9病毒和NDV-AH1毒株分布情况,以了解两株ND病毒感染动物时,病毒在体内各个组织中的分布情况。结果:F48E9感染组可以检测到病毒在肺、肝、脑组织中有分布,分离毒株NDV-AH1感染组也可以检测到病毒在肺、肝、脑脑组织中有分布。综上所述,试验从临床中收集到的病料,分离鉴定出三株NDV,利用交互免疫试验,说明分离毒株与Lasota毒株抗原性无明显差异。选取一株分离毒株和标准强毒株F48E9同时感染非免疫鸡,进一步用所建立免疫组化方法来检测NDV在机体的分布情况。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 图表目录
• 常用缩写表
• 文献综述
• 1 NDV的一般特性
• 2 NDV的分子生物学特性
• 3 ND诊断技术的研究进展
• 3.1 NDV的常规分离与鉴定
• 3.2 血清学诊断方法
• 3.3 分子生物学诊断技术
• 4 防制
• 5 免疫组化在禽病上的应用
• 6 本试验的研究目的与意义
• 引言
• 1 材料与方法
• 1.1 材料
• 1.2 方法
• 1.2.1 三株鸡新城疫病毒分离和交互免疫试验
• 1.2.2 免疫组化ABC法检测新城疫方法
• 2 结果与分析
• 2.1 三株禽新城疫病毒分离和交互免疫试验
• 2.2 F48E9强毒株、分离株NDV—AHl对鸡的感染
• 3 讨论
• 3.1 三株禽新城疫病毒分离鉴定和交互免疫试验
• 3.2 免疫组化ABC法方法建立
• 4 结论
• 参考文献
• 致谢
• 附录