论文摘要
目的:探讨重组人肝细胞生长因子对体外培养原代人脐静脉内皮细胞增殖、迁移的影响及其相关作用机制。 方法:从人脐静脉体外消化分离血管内皮细胞（HUVECs）,采用含 20%FBS 的 DMEM/F12 培养 HUVECs,通过倒置显微镜下观察细胞形态、电镜下观察 Weibel-Palade 小体及免疫细胞化学染色检测细胞中 FⅧr-Ag 的存在等方法对细胞进行鉴定。取第 2～4 代对数生长期的内皮细胞用于实验,分别用 1ng/ml、10ng/ml、25ng/ml、50ng/ml、100ng/ml 浓度 rhHGF 作用 HUVECs 24h、48h 及 72h 后,通过细胞计数及 MTT 法检测细胞增殖情况,采用空白区玻片法观察 HUVECs 的迁移以及透射电镜下观察细胞内超微结构的改变。在此基础上,应用流式细胞术及免疫细胞化学 SP 法检测细胞周期分布和细胞周期相关蛋白 CyclinE、CDK2 表达量的改变。 结果:通过胶原酶法消化能成功获得原代脐静脉内皮细胞（HUVECs）,HUVECs 能在 DMEM/F12 培养基中稳定生长并连续传代。电镜观察和Ⅷ因子免疫细胞化学法确定培养细胞为内皮细胞。rhHGF对培养的 HUVECs 生长有显著的促增殖作用和促迁移作用,并呈浓度和时间依赖性。在 1ng/ml～100ng/ml 浓度范围内,加入 rhHGF 24h 后,低浓度组（1、10ng/ml）促增殖作用不明显,而 25、50、100ng/ml组 HUVECs 增殖显著（P<0.01）,加入 rhHGF 48h 和 72h 后,HUVECs 增殖明显加快,与对照组相比 P<0.01,增殖率在 rhHGF 浓度为 100ng/ml作用 48h 时达最大值,增殖作用在 rhHGF 浓度为 100ng/ml 培养 72h
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