中国林蛙基因工程抗菌肽制备及生物学特性研究

论文摘要

本研究应用基因工程方法首次从中国林蛙皮肤组织中扩增了一个新的抗菌肽基因,对扩增的序列进行分析,结果表明,扩增的序列为一个新的中国林蛙抗菌肽基因;构建了此基因的原核表达质粒和真核表达质粒,经在大肠杆菌和酵母菌中诱导表达,筛选出了能够表达较高生物活性抗菌肽的酵母表达株;用纯化的表达产物进行体外抑菌谱、抑瘤作用、热稳定性及作用模式的研究。结果表明,G+和G-均表现抗性,可以体外抑杀肿瘤细胞,但不对正常人胚肾细胞无明显抑杀作用;温度和pH值对重组表达抗菌肽活性没有明显的影响;用重组表达抗菌肽的进行细胞溶血性实验、抗炎作用以及对血管通透性等小鼠体内安全性实验,结果表明,重组表达的抗菌肽有一定的溶血活性;能明显降低致炎剂导致的小鼠耳肿胀,能明显抑制小鼠血管通透性,从而降低炎症的发生率;给实验小鼠口服重组表达抗菌肽后,实验组小鼠体重一过性下降后恢复正常。本研究克隆并鉴定了一个新的中国林蛙抗菌肽基因,并比较和优化了中国林蛙抗菌肽在不同表达系统中表达、纯化等一系列的实验条件。确定了使用酵母表达系统表达重组林蛙抗菌肽的条件。利用得到的重组林蛙抗菌肽蛋白,进行生物活性研究,从而为基因工程生产重组林蛙抗菌肽和该抗菌肽的应用研究奠定了基础。

论文目录

• 前言
• 第一篇 文献综述
• 第一章 抗菌肽的研究进展
• 第二章 两栖类蛙皮抗菌肽及结构的研究
• 第三章 抗菌肽与基因工程
• 第二篇 研究内容
• 第一章 中国林蛙皮肤抗菌肽基因的克隆与序列分析
• 1 材料与方法
• 1.1 材料
• 1.2 方法
• 2 结果
• 3 讨论
• 4 小结
• 第二章 中国林蛙皮肤抗菌肽基因表达载体的构建及其在原核细胞中表达
• 1 材料与方法
• 1.1 材料
• 1.2 方法
• 2 结果
• 3 讨论
• 4 小结
• 第三章 中国林蛙皮肤抗菌肽基因酵母表达质粒的构建及筛选
• 1 材料与方法
• 1.1 材料
• 1.2 方法
• 2 结果
• 3 讨论
• 4 小结
• 第四章 中国林蛙皮肤抗菌肽基因在酵母系统中的表达优化与纯化
• 1 材料与方法
• 1.1 材料
• 1.2 方法
• 2 结果
• 3 讨论
• 4 小结
• 第五章 重组表达林蛙皮肤抗菌肽生物活性的研究
• 1 材料与方法
• 1.1 材料
• 1.2 方法
• 2 结果
• 3 讨论
• 4 小结
• 结论
• 参考文献
• 攻读期间发表的学术论文及其他成果
• 中文摘要
• 英文摘要
• 致谢
• 导师及作者简介
• CURRICULUM VITAE