23个油橄榄品种的RAPD分析

论文摘要

本研究采用RAPD技术对23个引种的油橄榄品种进行分类和鉴定研究。首先针对油橄榄基因组DNA的提取改良基因组DNA的提取方法，以获得较高质量的油橄榄基因组DNA用于RAPD分析。然后对油橄榄RAPD反应体系体系进行优化，以建立最佳RAPD扩增体系，筛选出适合油橄榄RAPD分析的引物对样品DNA进行PCR扩增。对样品的RAPD图谱进行分析，获得各样品的RAPD分子特征，最后统计和分析数据，同时对样品间的亲缘关系进行分析和讨论。研究结果如下：（1）本研究采用改良CTAB法，分别从新鲜和硅胶保存的油橄榄嫩叶中提取DNA，与其他部位提取效果相比量大，纯度高、褐化程度低；得到的DNA产率达到194—352ng／mg，OD260／OD280为1.82—2.08。通过琼脂糖凝胶电泳分析，DNA完整性较好，达到RAPD试验的要求。（2）建立了油橄榄RAPD最佳反应体系：PCR扩增的总体积为20μL，包括40ng的模板DNA，10×PCR buffer 2μL，1.5mmol／L MgCl2，0.2mmol／L dNTP，0.25μmol／L引物，Taq酶1U。扩增程序为：94℃预变性2min，94℃变性45s，36℃退火1min，72℃2min，40个循环后在72℃延伸4min，结束后在4℃条件下保存。最后用1.5％的琼脂糖凝胶电泳检测其扩增产物。（3）采用优化后的反应体系对80个引物进行筛选，经过三次重复，筛选出多态性和扩增重复性好、谱带清晰且较多的11个引物，用于油橄榄全部DNA样品的RAPD分析。（4）应用筛选出11个引物进行扩增，共产生127条带，其中78条为多态性带，占61.4％，平均每个引物扩增的DNA带数为11.55条，多态性DNA的带数为7.09条。扩增出的DNA片段在300—2000 bp之间，其中尤以500—1200 bp之间最多。根据扩增结果建立了品种间亲缘关系的UPGMA聚类图，将23个品种可划分为2大类。（5）对23个油橄榄品种的分子特征进行了分析，获得了4个品种的RAPD特异标记即阿维金娜在S1011—600bp、小果卡林在S1019—1400bp和S1025—2400bp、佛奥在S1025—400bp以及科拉蒂娜在S1011—650bp分别有各自的特异带。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 1 文献综述
• 1.1 RAPD简介
• 1.1.1 RAPD技术的优点
• 1.1.2 RAPD技术的缺点
• 1.2 分子标记在油橄榄种质资源和育种研究上的应用
• 1.2.1 品种鉴定及分类
• 1.2.2 构建遗传连锁图谱
• 1.2.3 种质遗传基础的研究
• 1.2.4 基因定位与克隆
• 2 本研究的目的与意义
• 3 材料与方法
• 3.1 材料
• 3.1.2 试剂
• 3.1.3 主要仪器
• 3.2 油橄榄基因组DNA的提取与检测
• 3.3 RAPD扩增反应参数的优化
• 3.4 PCR扩增和电泳
• 3.4.1 随机引物的筛选
• 3.4.2 PCR扩增
• 3.4.3 电泳检测
• 3.4.4 数据统计与分析
• 4.结果与分析
• 4.1 DNA提取及检测
• 4.1.1 DNA样品的纯度和产量
• 4.1.2 琼脂糖凝胶电泳分析
• 4.2 RAPD优化反应体系的建立
• 4.2.1 模板DNA浓度对RAPD扩增效果的影响
• 4.2.2 引物浓度对RAPD扩增效果的影响
• 4.2.3 dNTPs浓度对RAPD扩增效果的影响
• 4.2.4 Taq酶浓度对RAPD扩增结果的影响
• 4.2.5 Mg2+浓度对RAPD扩增结果的影响
• 4.3 引物的筛选
• 4.4 RAPD分析
• 4.4.1 油橄榄基因组DNA多态性
• 4.4.2 RAPD特异标记
• 4.5 聚类分析
• 4.5.1 相似系数分析
• 4.5.2 树状图分析
• 5.讨论
• 5.1 油橄榄基因组DNA的提取
• 5.2 反应体系和RAPD扩增效果之间的关系
• 5.3 RAPD稳定程度的可控性
• 5.4 油橄榄品种分类
• 5.5 油橄榄品种同物异名问题
• 6 结论
• 参考文献
• 致谢
• 攻读硕士学位期间发表的学术论文