论文摘要
研究背景与目的心血管疾病是威胁人类健康最常见的疾病之一,其中由动脉粥样硬化（atherosclerosis,AS）引起的冠状动脉粥样硬化性心脏病（冠心病CHD）的发病率及死亡率均占心血管疾病首位,且有上升趋势,而且日趋年轻化,引起广泛关注。近来研究表明基质金属蛋白酶（MMPS）是造成斑块不稳定的重要因素之一,它们可以通过降解纤维帽内胶原纤维及结缔组织致使纤维帽变薄,从而易于形成不稳定斑块[6-8]。MMP-9,又称明胶酶B,是MMPS家族中的一个重要成员,其作用底物包括明胶Ⅳ,V型明胶原,弹性蛋白等。而V型胶原是粥样斑块基底膜和纤维帽的重要组成部分,因此MMP-9在动脉粥样硬化斑块（atherosclerotic plaque, AP）内细胞外基质（extracellular matrix, ECM）降解过程中起着重要的作用[9]。因此对MMP-9的研究将给动脉硬化的诊断、治疗和预防开辟新的前景。本实验通过观察姜黄素对体外培养的人脐静脉内皮细胞（HUVEC）基质金属蛋白酶9（MMP-9）表达的影响,以及对肿瘤坏死因子α（TNF-α）诱导的人脐静脉内皮细胞（HUVEC）损伤模型基质金属蛋白酶9（MMP-9）表达的抑制作用,进一步探讨该药的药理作用,为该药的临床应用提供可靠的实验依据。研究方法及内容1.体外培养原代人脐静脉内皮细胞细胞并FⅧ因子对HUVEC进行鉴定,并且进行HUVEC细胞传代。2.姜黄素对体外培养的人脐静脉内皮细胞（HUVEC）基质金属蛋白酶9（MMP-9）表达的影响。将传代后生长良好的人脐静脉内皮细胞随机分为六组（空白对照组;姜黄素6.25μg/mL组;姜黄素12.5μg/mL组;姜黄素25μg/mL组;姜黄素50μg/mL组;姜黄素100μg/mL组）不同浓度的姜黄素作用人脐静脉内皮细胞24h后,采用免疫细胞化学染色的方法观察各组MMP-9的阳性表达强度,采用ELISA的方法测量各组MMP-9表达的浓度,以x±S表示结果,组间差异比较用方差分析（analysis of variance, ANOVA）检验。3.姜黄素对人脐静脉内皮细胞损伤模型基质金属蛋白酶9（MMP-9）表达的抑制作用。将传代后生长良好的人脐静脉内皮细胞随机分为五组（空白对照组:TNF-α组:姜黄素6.25μg/mL组;姜黄素12.5μg/mL组;姜黄素25μg/mL组）加入相同浓度TNF-α诱导半个小时后加入不同浓度的姜黄素处理人脐静脉内皮细胞24小时,采用免疫细胞化学染色的方法观察各组MMP-9的阳性表达强度,采用ELISA的方法测量MMP-9表达的浓度,以x±S表示结果,组间差异比较用方差分析检验。实验结果1. HUVEC在其正常基础状态下表达一定水平的基质金属蛋白酶（MMPS）。体外培养的血管内皮细胞一旦形成卵石样的单层,即可合成表达MMP-9.2.姜黄素作用于体外培养的HUVEC后, MMP-9的表达明显减少,而且表达的浓度随着姜黄素作用浓度的增加而降低,各组之间有明显差异（P<0.01）。3.人脐静脉血管内皮细胞在其正常基础状态下表达一定水平的基质金属蛋白酶,经TNF-α诱导后MMP-9表达量上升,在姜黄素的作用下MMP-9的表达量明显下降。而且表达的浓度随着姜黄素作用浓度的增加而降低,各组之间有明显差异（P<0.01）。结果与提示1.体外培养的HUVEC在其正常基础状态下表达一定水平的基质金属蛋白酶,经姜黄素处理后,MMP-9的阳性表达明显受到抑制,而且表达的浓度随着姜黄素作用浓度的增加而降低。2.体外培养的正常HUVEC经TNF-α诱导后MMP-9阳性表达量上升,在姜黄素的作用下MMP-9的阳性表达量明显下降。而且表达的浓度随着姜黄素作用浓度的增加而降低。3.姜黄素能够抑制体外培养的HUVEC细胞的MMP-9的阳性表达,从而起到减少细胞外基质重构、增强斑块的稳定性,恢复受损血管内皮（blood vessel endothelium; BVE ）的功能和防止血栓的形成,阻断促炎因子,降低动脉管径变小或闭塞的机率,对冠心病的发生和发展起到预防和治疗的作用。
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