论文摘要
小尾寒羊、滩羊及蒙古羊是我国北方地区主要的绵羊品种，是我国肉用绵羊品种培育及改良的主要遗传资源。为寻找可靠的肉质性状遗传标记，本试验克隆了绵羊肉质性状候选基因TNNC2、FABP4及DGAT1全编码序列，并以同一饲养条件下的286只绵羊随机样本为试验材料，采用PCR-SSCP和PCR-RFLP技术对其多态位点与主要肉质性状表型值进行了关联性分析，同时应用实时定量PCR技术对候选基因随滩羊日龄增长的表达规律进行了研究。研究结果如下：．1．绵羊TNNC2基因的全长编码区序列（GenBank accession number EU239357）包含一个完整的开放阅读框（Open Read Frame，ORE），由483个碱基编码的160个氨基酸组成。比对分析显示，绵羊TNNC2氨基酸序列与牛（NP 001069841）、猪（AAS88728）、人（CAG46682）、鼠（NP033420）和鸡（NP990781）的TNNC2氨基酸序列的相似性分别为99％、99％、98％、98％和89％。提示TNNC2基因在遗传进化上是一个高度保守的基因。2．克隆了绵羊FABP4基因的全长编码区序列（GenBank accession numberEU301804）。该序列包含有一个由399个碱基编码，132个氨基酸组成的ORF。比对分析表明，绵羊FABP4氨基酸序列与鼠（CAJ18597）、人（CAG33184）、牛（NP776739）、猪（ABK58164）、鸡（NP989621）以及绿头鸭（ABC96712）的FABP4氨基酸序列相似性分别为86％、86％、93％、84％、72％和74％。3．克隆了绵羊DGAT1基因的全长编码序列（GeneBank accession numberEU301803）。该序列包含一个完整的ORF，由1470个碱基编码的489个氨基酸组成。氨基酸序列分析显示，绵羊DGAT1氨基酸序列与人（NP036211）、鼠（AAH03717）、猪（AAM66767）和牛（NP777118）的DGAT1氨基酸序列的相似性分别为88％、84％、92％和98％。4．在供试绵羊群体中检测到TNNC2基因第一内含子第7bp处一个T碱基缺失，并命名为D等位基因。D等位基因在供试的小尾寒羊、滩羊及蒙古羊群体中频率分别为：0．78、0．77和0．71。x2检验表明，该位点基因及基因型频率在小尾寒羊、滩羊和蒙古羊试验群体中差异不显著（P＞0．05）。群体基因型与肉质性状关联性分析表明，该位点基因型显著影响绵羊肉质性状，DD和TD基因型个体的胴体重、背最长肌滴水损失和剪切力显著高于TT基因型个体，而大理石纹评分和pH值小于TT基因型个体（p＜0．01）。但DD与TD基因型个体之间在肉质性状上无显著差异。5．PCR-SSCP分析表明，绵羊FABP4基因第一内含子219bp处存在一个A＞G碱基突变，等位基因A在小尾寒羊、滩羊及蒙古羊试验群体中的频率分别为：0．68、0．57和0．60。位点多态信息含量属于高度多态。x2检验表明，三个供试绵羊群体该位点基因及基因型分布差异不显著（p＞0．05）。群体基因型与肉质性状关联性分析表明，AA和AG基因型绵羊个体肌内脂肪（Intramuscular Fat，IMF）含量显著高于GG基因型绵羊个体（p＜0．05）；AG和GG基因型个体背最长肌剪切力显著高于AA基因型个体（p＜0．05），但AG与GG基因型间差异不显著；AA基因型绵羊个体背最长肌大理石纹评分显著高于GG基因型个体（p＜0．05）。三种基因型个体之间在90日龄体重、胴体重、眼肌面积、净肉率、滴水损失、pH值和背膘厚度指标上差异不显著（p＞0．05）。6．在三个供试绵羊群体DGAT1基因17外显子1461bp处检测到一个T＞C突变，该突变产生／缺失一个Alu I限制性内切酶酶切位点。x2检验表明，C、T等位基因以及CC、TC、TT基因型在三个供试绵羊群体中分布差异不显著（p＞0．05）。基因型与供试绵羊群体肉质性状关联性分析表明，该位点多态显著影响绵羊个体的背最长肌剪切力、失水率、大理石评分和IMF含量（p＜0．05）。TT基因型个体IMF含量及大理石评分显著高于CC基因型，但失水率和剪切力显著低于CC基因型。TC基因型IMF含量及大理石评分介于TT和CC基因型个体之间。除剪切力和失水率两指标以外，TT与TC基因型个体肉质性状之间无显著差异（P＞0．05）。该位点多态性不影响绵羊背最长肌肉色、pH值、90日龄胴体重、眼肌面积、GR值、背膘厚度及净肉率（p＞0．05）。7．TNNC2、FABP4和DGAT1基因均在绵羊骨骼肌中表达，TNNC2为骨骼肌表达优势基因；FABP4及DGAT1在绵羊骨骼肌中的表达量较低，其mRNA含量为内参基因β-actin的1％左右。8．在120-200日龄段，TNNC2和FABP4基因背最长肌表达量随绵羊日龄增长显著升高（p＜0．01）。在90、120、160及200日龄段，DGAT1基因背最长肌表达量随绵羊日龄变化无显著规律，除120与160日龄外，其余各阶段表达量差异不显著（P＞0．05）。
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