论文摘要
目的：通过观察大鼠脑创伤后创伤区miRNA-21表达的动态变化,以及注射外源性miRNA-21后对脑创伤愈后的影响,探讨miRNA-21与脑创伤预后的关系。以及通过研究miRNA-21的靶基因程序性细胞死亡因子4（Programmed Cell Death 4,PDCD4）在创伤区的表达情况从而探讨miRNA-21的作用途径。方法：选用Wistar雄性大鼠588只,随机分为假手术对照组、创伤组、空白干预组、miRNA-21干预组,以上四组再分别分为2h、12h、24h、48h、72h、7d、14d七个亚组,各亚组14只,其中7只用于定量PCR检测,western blot检测,另7只用于组织切片检测。其中假手术对照组仅行头皮切开和磨除骨窗,保持硬膜完整,不进行打击。另外三组以液压打击法制作大鼠颅脑外伤模型,其中空白干预组,和miRNA-21干预组在制作大鼠颅脑外伤模型后立即以每分钟lul的速度用微量泵注射0.1%空白无药脂质体10ul/0.1%寡核苷酸脂质体10ul入损伤部位（前囟后3.5 mm,矢状缝右侧3 mm处）,注射后停留5分钟拔针。观察大鼠呼吸规律、生命体征平稳后,消毒、缝合头皮。分别在创伤后或干预后2h、12h、24h、48h、72h、7d、14d利用改良神经损伤评分法（Modified Neurological Severity Scores, mNSS）对四组大鼠分别评分,评定其行为学功能。神经行为学评分后处死取脑,其中7只于损伤区提取组织行定量PCR检测创伤区miRNA-21表达,Western blot检测PDCD4在创伤区的蛋白表达。另外7只取脑,石蜡包埋切片行原位末端标记法（TdT-mediated dUTP Nick-End Labeling, TUNEL）检测凋亡神经细胞,行免疫组化染色检测PDCD4阳性细胞在创伤区的表达。结果：大鼠脑创伤后创伤区miRNA-21表达较对照组明显升高,且随时间的延长而逐渐上升,于48h达峰,而后逐渐降至稳定水平,注射外源性miRNA-21于创伤区后,创伤灶周围miRNA-21表达较创伤组明显增高（P<0.05）,但是变化趋势趋于一致,也是于48小时前逐渐升高,达峰后逐渐降低,而注射空白脂质体后miRNA-21表达较创伤组无明显变化。创伤组和空白干预组创伤后伤区神经细胞凋亡的总数于伤后逐渐增加,于48-72小时左右达峰（P<0.05）,后逐渐下降。同时miRNA-21干预组脑创伤区miRNA-21表达的变化与创伤区周围凋亡细胞的变化均呈明显负相关（P<0.05）。脑创伤后空白干预组及创伤组大鼠脑创伤区周围各时间点PDCD4阳性细胞以及蛋白表达均低于假手术组（P<0.05）; miRNA-21干预组与空白干预组比较,其创伤区周围的PDCD4阳性细胞以及蛋白表达进一步明显降低（P<0.05）,同时miRNA-21干预组脑创伤区miRNA-21表达的变化与创伤区周围PDCD4阳性细胞以及蛋白表达的变化均呈明显负相关（P<0.05）. mNSS评分结果显示,与创伤组和空白干预组比较,miRNA-21干预组大鼠于伤后第2、3、7天其行为学功能得到明显改善（P<0.05）。结论：于创伤后给予miRNA-21的干预抑制了神经细胞的凋亡,改善了大鼠行为学功能,其改善程度与miRNA-21表达水平呈正相关。而PDCD4作为miRNA-21的靶基因有促进细胞凋亡的作用,随着miRNA-21表达的增加,PDCD4的表达随之降低,其降低程度与miRNA-21表达水平呈负相关。所以miRNA-21通过抑制PDCD4的表达从而抑制凋亡,可能是其修复颅脑创伤的途径之一。上调miRNA-21在颅脑创伤后的表达,有望改善脑创伤的预后,为临床治疗脑创伤患者提供了新思路。