论文摘要
当前,环境激素的生态效应已经引起人类的极大关注。由于环境激素种类多样,并且在环境中存在水平极低,为化学检测带来困难。因此,为了评价环境激素的污染状况及潜在危害,生物检测方法越来越受到人们的重视。在对环境激素的研究中,目前已经建立检测特异标志物——卵黄蛋白原的ELISA方法和普通RT-PCR方法。前者需要制备特异抗体,程序复杂,且相对于从分子水平进行的基因表达定量方法灵敏度仍有较大差距;而普通RT-PCR方法在基因表达定量方面也存在准确性较差的缺点,不能有效地反映剂量效应关系。本研究中通过对鱼类原代肝细胞暴露E2,采用Q-RT-PCR检测青鳉鱼和梭鱼VTG等基因的表达变化,期望建立较高灵敏度的环境雌激素效应评价方法。主要取得了如下研究结果:（1）本实验通过对青鳉鱼肝脏细胞原代培养,建立了稳定的毒理学实验模型,与传统的活体暴露实验相比,节约了实验动物材料、实验周期及实验耗材。为环境激素毒理学研究奠定了基础。（2）本研究中成功建立了实时定量RT-PCR与原代培养青鳉鱼肝细胞相结合的in vitro环境雌激素效应评价方法,并且显示出较高的灵敏度。（3）VTG-I、VTG-II、CHG-H、CHG-L和ERα在体外培养青鳉鱼肝细胞中均与雌激素暴露浓度呈现较好的剂量效应关系,其中VTG-I、VTG-II、CHG-H、CHG-L作为检测雌激素的生物标记物基因可优先选择。（4）本文通过扩增梭鱼VTG、β-actin基因,测定基因序列,建立检测E2暴露后梭鱼肝细胞VTG表达的实时定量RT-PCR方法。为环境激素的动态检测和分析鱼类对内分泌干扰物质的敏感性分析提供了方法学基础。