燕窝蛋白毛细管电泳分离方法的研究

论文摘要

本论文建立了毛细管电泳分离燕窝蛋白提取物的新方法。通过测定燕窝蛋白提取物的电泳图谱,为燕窝鉴伪提供了有效的途径。通过600C水浴提取四种品牌的燕窝（同仁堂、白云参茸、燕行家、燕之屋）中的蛋白质,蛋白提取率分别为6.14%、5.54%、5.90%、5.48%。采用考马斯亮蓝法测定蛋白提取液的浓度,分别767.16μg/mL、692.54μg/mL、737.31μg/mL、685.07μg/mL。凝胶电泳实验的结果表明所提取的燕窝蛋白分子量在35-116kDa之间。通过扫描四种品牌燕窝的蛋白提取物的紫外吸收光谱,确定了毛细管电泳的紫外检测波长为215nm。系统研究了毛细管管径、缓冲液类型、缓冲液pH值、缓冲液浓度、样品进样浓度、样品进样时间及分离电压等因素对于分离效果的影响。在优化的条件下,即检测波长为215nm、分离毛细管内径为75μm、毛细管温度为25℃、进样时间为7.5s、进样压力为0.5psi、进样浓度为2000μg/mL、电泳缓冲液为50mmol/L的磷酸盐缓冲液（pH2）,对四种品牌燕窝的蛋白提取物实现了良好分离。以同仁堂牌燕窝蛋白提取物的电泳图谱作为标准,确定了燕窝产品中蛋白质组份的两个特征峰,并以特征峰的迁移时间与峰面积比例为依据对其它三种品牌的燕窝产品进行了鉴伪。设计并制作了一种在毛细管柱上原位腐蚀而成的多孔膜接口,利用该接口将毛细管等电聚焦电泳（CIEF）与毛细管区带电泳（CZE）相连接构建了一种二维分离体系。随后将其初步应用于燕窝蛋白提取物的分离,结果表明CIEF-CZE二维毛细管电泳对燕窝蛋白提取物的分离能力高于一维的CZE电泳模式。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 1 前言
• 1.1 燕窝的概述
• 1.1.1 名称及历史
• 1.1.2 来源及产地
• 1.1.3 外形及分类
• 1.1.4 燕窝的化学成分
• 1.1.5 燕窝的保健及药用价值
• 1.1.6 燕窝制品的掺假手段
• 1.2 高效毛细管电泳概述
• 1.2.1 高效毛细管电泳的基本原理
• 1.2.2 高效毛细管电泳系统的基本结构
• 1.2.3 高效毛细管电泳的特点
• 1.2.4 高效毛细管电泳的分类
• 1.2.5 高效毛细管电泳在食品分析中的应用
• 1.3 二维毛细管电泳技术在蛋白质研究中的应用
• 1.4 本论文研究目的及意义
• 1.5 本论文的研究内容
• 2 材料与方法
• 2.1 实验材料
• 2.1.1 主要试剂
• 2.1.2 实验仪器
• 2.1.3 燕窝样品
• 2.1.4 主要实验溶液的配制
• 2.2 实验方法
• 2.2.1 提取燕窝中的蛋白质
• 2.2.2 提取液中蛋白质含量的测定及提取率的计算
• 2.2.3 确定燕窝中蛋白质的相对分子量范围
• 2.2.4 燕窝蛋白紫外吸收光谱的测定
• 2.2.5 燕窝蛋白毛细管区带电泳分离条件的优化
• 2.2.6 毛细管区带电泳法分离燕窝蛋白
• 2.2.7 半透性多空膜结构接口的制作及性能考察
• 2.2.8 CIEF-CZE二维毛细管电泳分离系统的构建
• 2.2.9 燕窝蛋白的二维毛细管电泳分离
• 3 结果与讨论
• 3.1 燕窝蛋白的基本性质
• 3.1.1 四种燕窝提取液中的蛋白含量及提取率
• 3.1.2 燕窝蛋白质相对分子量范围
• 3.1.3 燕窝中蛋白质的紫外吸收光谱测定
• 3.2 毛细管区带电泳分离方法的建立及应用
• 3.2.1 燕窝蛋白毛细管区带电泳分离条件的优化
• 3.2.2 燕窝蛋白的毛细管区带电泳法分析
• 3.3 二维毛细管电泳分离系统的构建及初步应用
• 3.3.1 构建半透性多空膜结构接口与性能评价
• 3.3.2 毛细管内壁线性聚丙烯酰胺涂层的制作
• 3.3.3 毛细管内壁CTAB动态涂层的制作
• 3.3.4 二维毛细管电泳系统分离燕窝蛋白
• 4 结论
• 5 展望
• 6 参考文献
• 7 攻读硕士学位期间发表论文情况
• 8 致谢