酶解草鱼制备降血压肽的研究

论文摘要

本文采用碱性蛋白酶水解草鱼蛋白制备具有血管紧张素转化酶（angiotension-I converting enzyme,EC3.4.15.1简称ACE）抑制活性的降血压肽。（1）对反相高效液相色谱（RP-HPLC）法和分光光度计法测定ACE抑制率进行比较研究:利用反相高效液相色谱法测定ACE抑制率,反应液直接进样,只需等度洗脱便可使Hip（马尿酸）、HL（二肽）、HHL（三肽）达到良好分离,并能对马尿酸的生成量进行定量计算,具有操作简便、快捷、精密度和准确性高的特点,可以用于对从食品中提取的降血压肽的测定。分光光度计法测定ACE抑制率具有良好的精确性和重现性,且实验操作方便快捷,可以用于各种样品的ACE抑制率的检测。对两种方法进行比较研究发现,反相高效液相色谱（RP-HPLC）法和分光光度计法均可用于对ACE抑制率的检测,两种方法均具有良好的重现性与准确性,高效液相色谱法相对于分光光度计法具有更好的精确性,能更好的对降血压多肽进行定量分析,而分光光度法操作简单实用性强,具有比高效液相色谱法更好的即时操作性。（2）采用三因素三水平正交实验设计,以水解度为指标,对碱性蛋白酶水解草鱼蛋白的条件进行了优化,确定了碱性蛋白酶水解草鱼蛋白制备降血压肽的最佳作用条件:底物浓度30%、pH8.5、温度50℃、酶与底物（蛋白质）比E∶S为48AU/kg。以ACE抑制率为指标,确定了水解终点为3h。（3）利用6KDa的聚砜类中空纤维超滤膜对草鱼蛋白降血压肽进行分离,确定了其较佳工艺条件为:0.1MP,25℃,15min。在此条件下进行超滤,透过液的ACE抑制率有明显提高,透过液ACE抑制率提高了11.41%。采用离子交换树脂对ACE抑制肽进行脱盐处理,以3.0ml/min的速度过离子交换树脂柱,脱盐率达到78%,氮回收率达到80%,而水解液的氮回收率几乎没有什么变化。（4）对经过工艺优化和精制处理的草鱼降血压肽进行理化指标的测定,发现经过精制处理后的草鱼降血压肽具有很好的溶解性且溶解性不会受到pH值的影响,有利于其在食品中的应用。鱼降血压肽的相对分子质量分布范围较窄。其相对分子质量分布范围在142～21281Da之间,并且主要集中在142～738Da之间,相对分子质量在738～329Da和329～142Da之间的组分含量分别为27.80%和34.21%。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 第1章 绪论
• 1.1 前言
• 1.2 高血压的发病机理
• 1.3 食品源 ACE 抑制肽的研究进展
• 1.4 鱼降血压多肽酶法制备的研究进展
• 1.5 本课题的研究意义，目的和内容
• 1.6 研究路线和技术关键
• 1.6.1 主要技术内容
• 1.6.2 关键技术和难点以及技术路线
• 第2章 ACE 抑制活性体外检测方法的确定
• 2.1 材料和设备
• 2.1.1 原料和主要试剂
• 2.1.2 主要仪器设备
• 2.2 试验方法
• 2.2.1 检测方法
• 2.3 结果与分析
• 2.3.1 ACE 抑制肽活性的分光光度体外检测方法
• 2.3.2 高效液相色谱法检测 ACE 的活性
• 2.4 小结
• 第3章 碱性蛋白酶水解条件的优化
• 3.1 材料和设备
• 3.1.1 材料与主要试剂
• 3.1.2 主要仪器设备
• 3.2 实验方法
• 3.3 结果与分析
• 3.3.1 草鱼蛋白成分分析
• 3.3.2 底物浓度、pH 值、温度、酶与底物比和作用时间等因素对水解度的影响
• 3.3.3 碱性蛋白酶水解条件的优选
• 3.3.4 碱性蛋白酶水解草鱼蛋白水解终点的确定
• 3.3.5 水解物中肽含量对 ACE 抑制率的影响
• 3.3.6 成分分析
• 3.4 小结
• 第4章 草鱼降血压肽的精制
• 4.1 材料和设备
• 4.1.1 原料和主要试剂
• 4.1.2 主要仪器设备
• 4.2 试验方法
• 4.2.1 草鱼降血压肽的超滤分离
• 4.2.2 脱盐方法
• 4.2.3 离子交换树脂再生处理
• 4.2.4 ACE 抑制肽产品成分分析
• 4.2.5 ACE 抑制肽产品理化性质分析
• 4.2.6 鱼肽的相对分子质量分布
• 4.3 结果与分析
• 4.3.1 不同温度对超滤通量的影响
• 4.3.2 不同压力对超滤通量的影响
• 4.3.3 时间对超滤通量的影响
• 4.3.4 超滤前后水解物的 ACE 活性抑制率
• 4.3.5 清洗
• 4.4 草鱼水解液脱盐
• 4.4.1 超滤后不同浓度的草鱼降血压肽进行脱盐
• 4.5 ACE 抑制肽产品成分
• 4.6 ACE 抑制肽理化性质分析
• 4.7 小结
• 第5章 结论和建议
• 5.1 结论
• 5.2 建议
• 参考文献
• 致谢
• 攻读学位期间的研究成果