轮叶党参对二乙基亚硝胺诱发肝及结肠毒性的预防作用

论文摘要

目的：轮叶党参（Codonopsis lanceolata）为一桔梗科党参属植物,是常用的补中益气药,现代研究认为,它具有一定的抗氧化、抗衰老、抗突变作用,同时有着预防各种病因引起的肝损伤的作用。二乙基亚硝胺（DEN）已证实为癌诱发剂,尤其在诱发肝癌效果显著。本实验通过探讨轮叶党参对DEN诱发肝及结肠损伤的毒性预防作用及其机制,为开发抗肿瘤药提供新的理论依据。方法：用活性酵母发酵轮叶党参,经乙醇提取,正丁醇萃取而获得发酵轮叶党参提取物。选用雌性昆明种小鼠60只,按体质量随机分为5组,分别为正常对照组、模型组、轮叶党参提取物低剂量组,中剂量及高剂量组,每组12只。通过模型组和轮叶党参组腹腔注射DEN （25mg/kg给予,1次／周,连续8周）建立肝及结肠损伤模型。轮叶党参低、中、高剂量组分别灌胃轮叶党参提取物1、2、4g/kg.d,连续8周,正常对照组和DEN组灌胃生理盐水,末次灌胃后禁食12 h,颈椎脱臼处死所有小鼠,迅速取出肝脏和结肠,取一部分组织,用10%福尔马林固定,切片,进行苏木素-伊红染色,观察肝及结肠粘膜病理变化情况。另取肝脏和结肠用冷匀浆介质制成10%组织匀浆,用ELISA法检测肝及结肠组织中环氧化酶-1（Cycloxygenase-1, COX-1）、环氧化酶-2（Cycloxygenase-2, COX-2）、核因子κB （Nuclear factor-KB, NF-κB）,比色法检测肝及结肠组织中一氧化氮（NO）、诱导型一氧化氮合酶（iNOS）.总一氧化氮合酶（TNOS）。结果：（1）肝组织中,轮叶党参提取物组与模型组比较, COX-1蛋白表达显著下降,高、中、低剂量组均有统计学意义（P<0.05）,轮叶党参低剂量组和高剂量组COX-2蛋白表达明显低于模型组,其差异具有统计学意义（P<0.05）；结肠组织中,轮叶党参高、中、低剂量组COX-1蛋白含量均低于模型组,其差异有统计学意义（P<0.01）,轮叶党参低、中、高剂量组COX-2蛋白表达和NF-κB蛋白表达明显低于模型组,其差异具有统计学意义（P<0.05）。（2）检测发现轮叶党参提取物给药组与模型组相比iNOS、TNOS酶活性被抑制,NO蛋白含量表达明显下降,肝组织中轮叶党参中剂量与高剂量组iNOS活性表达明显低于模型组,其差异具有统计学意义（P<0.05）,轮叶党参低、中、高剂量组NO活性表达明显低于模型组,其差异具有统计学意义（P<0.01）；结肠组织中轮叶党参低、中、高剂量组iNOS活性表达明显低于模型组,其差异具有统计学意义（P<0.01）,轮叶党参低、中、高剂量TNOS活性表达明显低于模型组,其差异具有统计学意义（P<0.05）。（3）病理学标本观察结果,模型组动物肝脏存在大量肝细胞变性、坏死,而用药组肝脏损害均较模型组轻。结论：1.发酵轮叶党参提取物对DEN诱发小鼠肝脏及结肠毒性有一定的预防作用；2.发酵轮叶党参提取物可通过下调NF-κB蛋白的表达,来抑制COX-2蛋白的表达,同时抑制iNOS的活性,继而引起NO含量降低,对DEN诱发肝及结肠毒性起预防作用。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 第一章 前言
• 第二章 材料与方法
• 2.1 实验动物
• 2.2 发酵轮叶党参正丁醇提取物的制备
• 2.3 实验用药与仪器
• 2.4 动物处理
• 2.5 动物肝及结肠NO含量、iNOS、TNOS酶活性的测定
• 2.6 动物肝及结肠COX-1、COX-2、NF-κB蛋白测定（ELISA法）
• 2.7 肝及结肠组织病理标本的制备及苏木素-伊红染色方法
• 2.8 病理观察方法
• 2.9 统计学方法
• 第三章 实验结果
• 3.1 HE染色镜检结果
• 3.2 不同浓度轮叶党参对DEN诱发肝脏COX-1、COX-2含量的影响
• 3.3 不同浓度轮叶党参对DEN诱发肝脏NO含量、iNOS酶活性的影响
• 3.4 不同浓度轮叶党参对DEN诱发结肠COX-1、COX-2、NF-κB含量的影响
• 3.5 不同浓度轮叶党参对DEN诱发结肠iNOS、TNOS酶活性的影响
• 第四章 讨论
• 第五章 结论
• 参考文献
• 综述
• 参考文献
• 致谢