带有三联密码AAA的Kozak序列对品蹄疫DNA疫苗免疫效果的研究

带有三联密码AAA的Kozak序列对品蹄疫DNA疫苗免疫效果的研究

论文摘要

目的:比较引入六种不同Kozak序列口蹄疫DNA疫苗的表达水平及免疫效果。方法:在口蹄疫DNA疫苗抗原编码基因VP1起始位点引入6种不同的Kozak序列(KZ1~KZ6),插入真核表达载体pVAX1,制备口蹄疫DNA疫苗,对6-8周龄BLAB/C小鼠进行免疫,用酶联免疫吸附试验(enzymelinked immunosorbent assay,ELISA),分析实验动物外周血抗VP1的抗体效价;同时插入带有绿色荧光蛋白的融合表达载体pEGFP-N1,构建6种体外表达质粒,转染HeLa细胞,进行瞬时表达并分析体外表达水平。结果:引入Kozak序列KZ6的疫苗质粒pKV6接种动物后产生的免疫抗体水平高于其它组;相应的体外表达质粒pKG6转染HeLa细胞后体外表达水平办高于其它组。结论:引入Kozak序列KZ6(带有三联密码AAA)的口蹄疫DNA疫苗,能最有效地增加疫苗的蛋白表达量,并达到最佳的免疫效果。

论文目录

  • 摘要
  • Abstract
  • 第一章 前言
  • 第二章 实验材料
  • 2.1 实验仪器
  • 2.2 菌种、细胞株和载体
  • 2.3 常用试剂
  • 2.4 培养基的制备
  • 2.5 溶液的配制
  • 2.6 细胞培养液的配制
  • 2.7 实验动物
  • 第三章 实验方法
  • 3.1 PCR扩增
  • 3.2 疫苗质粒的构建
  • 3.3 体外表达质粒的构建
  • 3.4 细胞转染
  • 3.5 原核表达抗原的制备
  • 3.6 免疫动物
  • 3.7 ELISA分析抗体效价
  • 3.8 统计学分析
  • 第四章 结果
  • 4.1 质粒鉴定
  • 4.2 蛋白表达水平
  • 4.3 pGEXT-VP1的构建及鉴定
  • 4.4 pGEXT-VP1在宿主菌 K802中的表达
  • 4.5 pGEXT-VP1融合蛋白的纯化
  • 4.6 IgG抗体水平
  • 第五章 讨论
  • 结论
  • 参考文献
  • 致谢
  • 附: 综述
  • 附: 英文缩写词
  • 相关论文文献

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