他克莫司胶囊人体药代动力学及生物等效性研究

论文摘要

目的:建立人全血中他克莫司的高效液相色谱-质谱联用检测法（HPLC-ESI-MS/MS）,研究他克莫司人体药动力参数,并评价他克莫司胶囊的相对生物利用度和生物等效性。方法:参考文献方法,改良建立了精确、灵敏、重现性和专一性好的LC-MS/MS分析法。全血样品经溶血后,取100μL血样加入10μL内标（环孢霉素D）和150μL氟化钠溶液,混匀;再加入1mL乙醚提取,有机相用氮气吹干,残渣用100μL70%乙腈水溶液重组,转移至进样瓶,进样10μL供LC-MS/MS分析。色谱条件:Thermo Hypersil Silica分析柱（150×2.1 mm,5μm）,乙腈-水（含20 mM醋酸铵和0.1%甲酸）为流动相（98:2,ⅴ/ⅴ）,流速0.3 mL/min,进样量10μL。质谱条件:电喷雾离子源,正离子扫描,MRM扫描分析,FK506和IS的离子选择通道分别为821.5→768.4 amu和1233.8→1216.7 amu。健康志愿者22名,随机双交叉单剂量口服杭州中美华东制药有限公司研制的他克莫司胶囊（受试制剂,T）和日本藤泽制药有限公司（爱尔兰厂）生产的普乐可复胶囊（参比制剂,R）,剂量均为5mg,剂间间隔为2周。分别于服药后72h内多点抽取静脉血;用高效液相色谱-质谱联用法测定血浆中他克莫司的浓度。用DAS程序计算药动力学参数和相对生物利用度并评价两种制剂生物等效性。AUC（0-72）,AUC（0-∞）和Cmax经方差分析和双单侧t检验,Tmax进行秩和检验。结果:血浆浓度在0.20～100.0 ng/mL范围内线性关系良好（r=0.9991）;LLOQ（0.20ng/mL）的精密度和准确度为9.84%和96.2%。低（0.30ng/mL）、中（15.0ng/mL）、高（80.0ng/mL）浓度的批内精密度、准确度分别为1.17-9.47%和89.3-109.5%;批间精密度和准确度分别为1.37-4.17%和93.4-107.9%。低、中、高浓度的FK506和内标的平均回收率分别为71.68%、65.65%、65.69%和73.58%。稳定性试验结果表明,血样品经过3次冻融,仍保持稳定;待测样品在自动进样器中至少能够保持12h稳定。单剂量口服他克莫司受试制剂和参比制剂后,血浆中FK506的Cmax分别为（49.41±22.21）ng/mL和（41.30±19.63）ng/mL;Tmax分别为（1.20±0.40）h和（1.70±0.77）h;AUC（0-72）分别为（366.996±191.246）ng·h/mL和（330.274±143.473）ng·h/mL;AUC（0-∞）分另0为（437.017±239.350）ng·h/mL和（394.944±186.339） ng·h/mL。试验制剂和参比制剂间无显著差异（p>0.05）;Cmax的90%可信区间为（97.1—142.3）%,AUC（0-72）的90%可信区间为（86.0—124.4）%,AUC（0-∞）的90%可信区间为（84.5—123.4）%;试验制剂与参比制剂的人体相对生物利用度按AUC（0-72）计算为（114.754±48.690）%。结论:本研究采用的高效液相色谱-质谱联用法灵敏度高、重现性好,可用于全血中他克莫司浓度的检测和临床药代动力学研究。受试制剂与参比制剂的人体相对生物利用度符合要求,受试制剂与参比制剂具有生物等效性。

论文目录

• 致谢
• 摘要
• ABSTRACT
• 缩写字母表
• 前言
• 第一部分 LC-MS/MS法测定人全血中他克莫司浓度的方法建立与评价
• 1.1 材料与方法
• 1.1.1 仪器
• 1.1.2 试剂和药品
• 1.1.3 溶液的配制
• 1.1.4 人全血标准曲线样品的制备
• 1.1.5 人全血质控样品的制备
• 1.1.6 分析资料的处理方法
• 1.2 方法论证
• 1.2.1 LC-MS/MS条件
• 1.2.1.1 色谱条件
• 1.2.1.2 质谱条件
• 1.2.2 人全血样品的处理步骤
• 1.2.3 论证步骤
• 1.2.3.1 专属性
• 1.2.3.2 线性范围
• 1.2.3.3 最低定量限
• 1.2.3.4 准确度
• 1.2.3.5 精密度
• 1.2.3.6 提取回收率
• 1.2.3.7 稳定性
• 1.2.3.8 介质效应
• 1.3 结果和讨论
• 1.3.1 专属性
• 1.3.2 线性范围
• 1.3.3 最低定量限
• 1.3.4 准确度和精密度
• 1.3.5 提取回收率
• 1.3.6 稳定性
• 1.3.6.1 样品在全自动进样器中的稳定性
• 1.3.6.2 多次冻融试验
• 1.3.7 介质效应
• 1.4 结论
• 第二部分 他克莫司的药代动力学研究与生物等效性评价
• 2.1 材料与方法
• 2.1.1 受试者选择
• 2.1.1.1 试验对象
• 2.1.1.2 入选标准
• 2.1.1.3 排除标准
• 2.1.2 试验药品
• 2.1.3 给药方式及剂量选择
• 2.1.4 试验方法
• 2.1.5 血浆样品的采集
• 2.1.6 血药浓度测定方法
• 2.2 数据分析方法
• 2.2.1 房室模型参数估算法
• 2.2.2 非房室模型依赖性参数估算方法
• 2.2.3 生物利用度F估算方法
• 2.2.4 统计分析
• 2.2.4.1 方差分析
• 2.2.4.2 等效性检验
• 2.3 试验结果
• 2.3.1 血药浓度-时间数据
• 2.3.2 药代动力学参数
• 2.3.3 相对生物利用度
• 2.3.4 生物等效性分析
• 2.3.5 安全评估
• 2.4 讨论和结论
• 参考文献
• 第三部分 综述:他克莫司研究新进展
• 第四部分 个人简历
• 第五部分 在学期间的研究课题及发表的论文