DNA低甲基化对SLE T细胞CD40Ligand（CD40LG）基因表达及自身B细胞IgG产生的影响研究

论文摘要

目的:探讨DNA甲基化对T细胞CD40LG基因表达调控及其在系统性红斑狼疮（SLE）发病机制中的作用。方法:选取活动性SLE患者（女性6例,男性4例）,健康志愿者（女性6例,男性4例）,用磁珠分离法分离血CD4+T、CD8+T细胞及B细胞后,以T、B细胞以1:4比例混合于96孔培养板中（105细胞/孔）,培养8天,给与CD40LG单克隆抗体干预。药物处理组实验对象为健康志愿者（男性3例,女性3例）,用磁珠分离法分离血CD4+T、CD8+T细胞,分别予以DNA甲基化抑制剂5-azacytidine,Procainamide,及EKK信号通路抑制剂Hydralazine,PD98059处理72小时后与自体B细胞体外培养8天,ELISA法测定上清IgG产量。同时Realtime RT-PCR检测药物处理后CD4+T,CD8+T细胞CD40LG mRNA表达。结果:在SLE患者组中,CD4+T,CD8+T细胞与自体B细胞体外培养上清中的IgG产量与正常对照组相比明显增高（P均=0.000）。在SLE女性患者组中,CD4+T细胞+B细胞及CD8+T细胞+B细胞混合培养的结果与预先加CD40LG单抗组比较IgG产量显著增高（P=0.034,P=0.047）,与B细胞单独培养对照组比较IgG产量也显著增高（P=0.011,P=0.012）。在SLE男性患者组中CD4+T细胞+B细胞及CD8+T细胞+B细胞培养后IgG产量较对照组亦有明显升高（P均=0.000）,但与预先加CD40LG单抗组比较无显著差异（P＞0.05）。在活动性SLE患者中CD4+T细胞中CD40LG mRNA表达升高与IgG产量有相关性（r=0.809,P=0.001）。经5-azacytidine,procainamide,Hydralazine,PD98059处理后,正常女性CD4+T细胞CD40LG mRNA表达明显升高（P=0.002,P=0.047,P=0.039,P=0.048）。与自体B细胞体外培养上清IgG产量亦明显升高（P=0.02,P=0.026,P=0.013,P=0.008）。正常男性CD4+T细胞经药物处理后CD40LG mRNA表达及IgG产量无明显改变（P＞0.05）。结论:女性活动性SLE患者T细胞CD40LG表达升高,自身B细胞IgG抗体的生成增加。DNA低甲基化促进女性T细胞CD40LG表达上调和B细胞IgG抗体的产生。DNA低甲基化在SLE的发病中起重要作用。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 前言
• 第一章 材料和方法
• 1.1 材料
• 1.2 实验方法
• 1.3 统计学方法
• 第二章 结果
• 2.1 Eilsa双抗体夹心法测定IgG产量
• 2.2 CD40LG mRNA表达水平
• 第三章 讨论
• 第四章 结论
• 参考文献
• 综述
• 参考文献
• 致谢
• 攻读学位期间主要的研究成果