论文摘要
抑郁症（depression）由复杂原因引起的以情绪低落为主要症状的一组临床症状群或状态,是一类心境障碍（mood disorders）或情感障碍（affective disorders）疾病。抑郁症给人类带来的危害极大,数百年来现代医学一直致力于研究和揭示该病的发生机制,但是目前仍然不能完全而确切的解释该病的来龙去脉,西药治疗抑郁症目前还存在一些盲点和附带反应。祖国医学源远流长,中医药方法治疗情致类疾病由来已久,中医理论从独特的视角认识并治疗情致疾病,且具有现代医学不可替代的许多优势,不仅对抑郁症情绪改变的核心症状有明确的疗效,对该病的周边症状的改善也有明显的作用。因此,为了更好的推广中医药方法治疗抑郁症这一手段,并在世界范围内得到认可,作为中医药科研工作者必然要致力于用现代科技手段来揭示传统医学方法原理的科研工作中。我们的课题小组已经完成了大量的前期工作,我的论文是在这一基础上的延伸与拓展,是一系列有关抑郁症的基础动物实验研究部分,为进一步的临床研究提供前期的工作依据和理论基础。目的:通过建立慢性应激大鼠模型,一方面围绕若干抑郁症的核心精神症状设立一系列行为学指标的检测,观察中医药方法对这些行为学的影响,并进行系统的动态行为学观察,观察中药和电针的不同起效时段,并进一步探讨建立慢性应激的证侯模型的可能性;另一方面试图进一步发掘抑郁症发病机制的某些新途径,并观察中医药方法是否通过这些新途径来干预抑郁症的发生,以及电针、中药和氟西丁在抗抑郁的过程中各自的作用特点。方法:采用慢性应激结合孤养的方法建立抑郁大鼠模型;将大鼠随机分为5组,分别为正常组、模型组、氟西丁组、中药组、电针组,每组10只;采用开野实验、强迫游泳实验、“Y”型电迷宫实验,糖水消耗实验等判断模型的可靠程度并观察中药和电针对模型大鼠活动性、绝望程度、学习记忆能力以及快感缺失等行为表现的影响;放免法检测大鼠下丘脑CRF,垂体ACTH、肾上腺CORT;免疫组化方法检测海马内GR、NMDA、NR2B;PKA、CREB;Nestin。结果:1.慢性应激结合孤养方法建立抑郁模型大鼠行为学检测:1.1 Open-Field试验:1.1.1水平运动结果:与空白组比较,模型大鼠活动总路程显著下降（P<0.01）,中药组和电针组总路程与空白组比较也有明显下降（P<0.01）,但是与模型组比较差异性仍有显著意义（P<0.01）;中药和电针组与氟西丁组比较有显著差异（P<0.05,P<0.01）。实验第10天各组大鼠水平运动的总路程即表现出一定的差异,电针和中药NY-3号都有一定的作用,但电针组起效快,中药组的起效过程较为平稳。1.1.1垂直运动结果:与空白组比较,造模各组站立次数均显著减少（P<0.01）;与模型组比较,中药组和电针组有统计学意义（分别P<0.01,P<0.05）;电针组与氟西丁组比较无统计学意义（P>0.05）,而中药组与氟西丁组比较有统计学意义（P<0.05）;中药组与电针组之间比较有统计学意义（P<0.05）。实验第10天各组大鼠站立次数也开始表现出一定的差异,氟西丁和电针起效较早,中药组作用较为平稳。1.2强迫游泳试验:各组大鼠强迫游泳实验成绩显示:与空白组比较,应激使模型大鼠的游泳不动时间显著延长（P<0.01）;三个治疗组与模型组比较游泳不动时间也有统计学意义（分别P<0.01,P<0.05）。实验开始后第一周,各造模组游泳不动时间即迅速延长,但治疗各组均表现出一定的拮抗作用。与空白组和模型组比较,三组的游泳不动时间较空白组差距较大,虽然与模型组比较有统计学意义,但仍然距模型组水平比较接近。1.3“Y”型电迷宫实验:1.3.1各组大鼠学习成绩显示:与空白组比较,应激使各组造模大鼠的学习能力大幅度下降（P<0.01）;与模型组比较,中药组和电针组学习成绩有所提高（P<0.01,P<0.05）;与氟西丁组比较,中药组学习成绩有显著差异（P<0.05）,电针组无显著差异（P>0.05）。电针组与中药组比较其学习成绩有统计学意义（P<0.05）。1.3.2各组大鼠记忆成绩结果显示:与空白组比较,应激使各组造模大鼠的记忆能力大幅度下降（P<0.01,P<0.05）;与模型组比较,中药组和电针组记忆成绩有所提高（P<0.01）;与氟西丁组比较,中药组和电针组的记忆成绩无显著差异（P>0.05）。电针组与中药组比较其学习成绩无统计学意义（P<0.05）。1.4各组大鼠糖水消耗实验结果:与空白组比较,应激使各组造模大鼠一小时内糖水摄入量明显减少（P<0.01）,但治疗各组与模型组比较能明显增加糖水的摄取量（P<0.05或P<0.01）;其中电针组的糖水摄取量多于中药组,结果有显著性意义（P<0.01）。2.各组大鼠下丘脑CRF,垂体ACTH、肾上腺CORT放免法检测结果:与空白组比较,模型组大鼠下丘脑CRF,垂体ACTH,肾上腺CORT显著升高（P<0.01或P<0.05）。与模型组比较,除中药、电针对垂体ACTH的含量影响没有显著性意义（P>0.05）外,各组治疗组对大鼠HPA轴各激素含量升高都有明显拮抗作用（P<0.01或P<0.05）。在垂体ACTH含量上,电针和中药治疗后仅显示出降低垂体ACTH含量的趋势。3.各组大鼠海马GR、NMDAR、NR2B免疫组化检测结果:3.1海马GR:与空白组比较,模型组大鼠海马内GR表达强度有显著差异（P<0.01）,而中药组、电针组和氟西丁组均无统计学差异（P>0.05）;与模型组比较,氟西丁组差异无显著性（P>0.05）,中药组和电针组GR表达强度有显著性意义（P<0.05,P<0.01）,三个治疗组之间比较都没有统计学意义（P>0.05）,但从秩和和平均秩和的数据来看,电针组比氟西丁组和中药组的作用更接近于正常组。3.2海马NMDAR:与空白组比较,模型组大鼠海马内GR表达强度有显著差异（P<0.05）,而中药组、电针组和氟西丁组均无统计学差异（P>0.05）;与模型组比较,氟西丁组未表现出显著差异（P>0.05）,而中药和电针组与之比较有显著性差异（P<0.01）;三个治疗组之间海马GR表达强度无统计学差异（P>0.05）。3.3海马NR2B:与空白组比较,模型组和中药组大鼠海马内NR2B表达强度有显著差异（P<0.01）,而电针组和氟西丁组均无统计学差异（P>0.05）;与模型组比较,氟西丁组和电针组有显著性差异（P<0.01,P<0.05）,中药组与之比较无统计学差异（P>0.05）;与氟西丁组比较,中药组有显著性差异（P<0.01）,电针组差异无显著性（P>0.05）;电针组与中药组之间比较也有显著性差异（P<0.01）。4.各组大鼠海马PKA、CREB免疫组化检测结果:4.1海马PKA:与空白组比较,模型大鼠海马内PKA阳性表达强度有显著差异（P<0.05）,三个治疗组与之比较差异无显著性（P>0.05）;与模型组比较,氟西丁组无显著性差异（P>0.05）而中药和电针组差异有显著性（P<0.01）;与氟西丁组比较,中药组无显著差异（P>0.05）而电针组有差异有显著性（P<0.01）;中药和电针组之间无显著性差异（P<0.05）。4.2海马CREB:与空白组比较,模型大鼠海马内CREB阳性表达强度有显著差异（P<0.01）,三个治疗组与之比较差异无显著性（P>0.05）;与模型组比较,三个治疗组都表现出显著性差异（分别P<0.05,P<0.01,P<0.01）;三组治疗组之间两两比较也没有显著性差异（P>0.05）。5.各组大鼠海马Nestin免疫组化检测结果:与空白组比较,模型大鼠海马内Nestin阳性表达强度差异未表现出显著性（P>0.05）,中药和电针组与之比较也没有显著性差异（P>0.05）而氟西丁组与之有显著性差异（P<0.01）;与模型组比较,电针组有显著性差异外（P<0.01）,其余两个治疗组与之比较差异无显著性（P>0.05）;与氟西丁组比较,中药和电针组均有显著性差异（P<0.01）,而中药和电针组之间差异无显著性（P<0.01）。结论:1.本实验所采用的慢性应激结合孤养的动物模型能够表现出一定的活动性和兴趣降低,快感缺失以及学习记忆能力减退等现象,证明实验在行为学上能够模仿抑郁的某些精神症状的表现。在参考抑郁症的“病”“证”结合研究成果后,我们初步假设本次实验所建立的慢性应激结合孤养的动物模型可能与“肝郁”和“脾气虚”两种证型关系较为密切。实验结果提示中药和电针具有很好的抵抗大鼠活动度和兴趣减低、改善慢性应激大鼠的行为绝望程度、提高学习记忆能力,增加大鼠对奖赏刺激的敏感性、改善大鼠的快感缺失等一系列拟抑郁症精神症状的行为学改变。电针对大鼠的活动性和探究行为的影响起效较快,而氟西丁和中药则表现出较为平稳的疗效。2.慢性应激结合孤养能持续激活脑内HPA轴,提示实验造模能够模仿抑郁发病中的HPA轴持续亢进的状态。中药和电针具有拮抗模型鼠体内异常的HPA轴亢进。3.慢性应激结合孤养大鼠模型的海马GR、NMDAR、NR2B的阳性表达降低,其原因可能是由于Glu的在突触内长期堆积,导致三种受体的敏感性降低。这样可以使HPA轴的负反馈作用降低,导致其过度激活而引发一系列症状。中药和电针具有拮抗模型鼠海马GR、NMDAR、NR2B敏感性降低的作用。4.慢性应激结合孤养大鼠模型的海马各亚区PKA、CREB降低,这种改变可能进一步通过其下游机制影响学习记忆功能和造成海马神经元的损伤,其下游通路有待进一步探讨。中药和电针具有拮抗模型鼠海马各亚区PKA、CREB降低的作用。5.慢性应激结合孤养大鼠模型的海马内Nestin的阳性表达有降低趋势,我们认为这种改变可能是HPA轴-GR-NMDA通路的作用结果。中药和电针具有增强海马内Nestin的作用,且其作用机制可能与氟西丁不同。