生物转化制备人参皂苷C-K的研究

论文摘要

本论文对能转化生成人参皂苷Compound-K（C-K）的酶的性质进行了研究，并对人参皂苷C-K进行分离纯化。在本论文中，分别对细菌和真菌两种微生物进行发酵培养，提取出两种来源不同的酶，进而采用微生物酶转化法，通过改变人参二醇类皂苷（PPD）来转化生成人参皂苷C-K，并用高效液相色谱对其纯度进行确认。细菌Microbacterium sp.GS514所产酶对Rb1等人参二醇类皂苷（PPD）降解过程是PPD→Rg3→Rh2，真菌sp.g48所生成的酶与Microbacterium sp.GS514菌不同，对PPD人参皂苷降解途径为PPD→F2→C-K。因此，本论文采用真菌所产酶与PPD作用获得C-K。真菌sp.g48菌酶经过DEAE-Cellulose离子交换层析柱分离后，经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳测定酶分子量为77KDa，不同于前届研究生郑常龙从sp.848菌酶分子量82KDa。最佳酶反应时间为22h，最适温度为45oC，最适pH值5.0。其纯酶对于人参二醇类皂苷Rb1、Rb2、Rc、Rd、F2等单体降解能力强，说明该酶为多种糖苷水解酶；但是对人参皂苷Rb1、Rd和F2可较大程度转化为人参皂苷C-K，而该酶对于人参皂苷Rc，转化生成人参皂苷C-K的程度较小。通过大量实验，人参二醇类皂苷与微生物产生酶反应后经过AB-8大孔吸附树脂处理得到C-K粗品，进而用硅胶柱分离得到部分纯品C-K和纯度为70-80%左右的C-K，其C-K的提纯方法有待于提高。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 第一章 文献综述
• 1.1 人参的分布、生长环境、形态、分类、及化学成分
• 1.1.1 人参的分布、生长环境及形态
• 1.1.2 人参的分类
• 1.1.3 人参的化学成分
• 1.2 人参皂苷的性质及命名
• 1.2.1 苷类
• 1.2.2 萜类（Terpenoids）
• 1.2.3 皂苷（saponins）
• 1.3 人参皂苷的化学结构特点及理化性质
• 1.3.1 人参皂苷的化学结构
• 1.3.2 人参皂苷的理化性质
• 1.3.2.1 皂苷的外观及溶解性
• 1.3.2.2 皂苷的水解性
• 1.4 人参皂苷的药理作用
• 1.4.1 人参皂苷的肿瘤抑制作用
• 1.4.2 人参皂苷的增强免疫力作用
• 1.4.3 人参皂苷的抗疲劳作用
• 1.4.4 几种人参皂苷的药理活性
• 1.5 改变人参皂苷的糖基而提高其活性方面的研究
• 1.5.1 化学法改变皂苷糖基
• 1.5.2 酶法改变皂苷糖基提高其活性
• 1.6 人参皂苷的分离及分析方法
• 1.6.1 常见的提取与纯化方法
• 1.6.2 人参皂苷酸催化水解及酶解转化
• 1.6.3 人参皂苷分离及分析方法
• 1.6.4 人参皂苷结构测定方法
• 1.7 人参皂苷结构改造方面的研究进展
• 1.7.1 人参皂苷的化学水解和转化研究进展
• 1.8 本论文主要研究内容
• 第二章 实验材料与方法
• 2.1 实验材料
• 2.2 实验方法
• 2.2.1 人参皂苷糖苷酶的分离纯化
• 2.2.2 人参皂苷糖苷酶纯度及分子量的测定
• 2.2.3 酶反应的最适条件的确定
• 2.2.4 酶法 PPD 转化为人参皂苷酶 C-K
• 2.2.5 产物的分离
• 2.2.6 人参皂苷 C-K 的分离
• 2.2.7 高效液相色谱检测
• 第三章 结果与讨论
• 3.1 产酶菌的筛选以及培养基的确定
• 3.2 酶蛋白的分离提纯
• 3.2.1 DEAE-纤维素柱分离
• 3.2.2 酶的纯度及其分子量
• 3.3 生成 C-K 酶的性质
• 3.3.1 对 Rb1，Rb2，Rc，Rd，F2 等人参二醇类不同单体皂苷糖基的水解
• 3.3.2 最适酶反应条件的确定
• 3.4 从人参二醇类皂苷 PPD 大量制备人参皂苷 C-K
• 3.4.1 酶反应制备 C-K
• 3.4.2 大孔树脂的分离除杂
• 3.4.3 人参皂苷 C-K 的分离与提纯
• 第四章 结论
• 参考文献
• 致谢