人胃癌SGC7901细胞培养技术及应用

论文摘要

以人胃癌SGC7901细胞为研究对象,在确定细胞生长条件和生长规律的基础上,对SGC7901细胞进行了研究。通过比较胃癌细胞SGC7901在DMEM和RPMI1640两种常规培养基中的生长形态,以及流式细胞仪分析胃癌细胞SGC7901在DMEM和RPMI1640两种常规培养基中的死亡率。最终确定,人胃癌SGC7901细胞培养于含10%小牛血清、青霉素100 U/mL和链霉素1.0×10-4g/mL的DMEM培养液中,在37℃、5%CO2的细胞培养箱内传代培养。采用细胞计数法,绘制了胃癌细胞SGC7901的生长曲线,胃癌细胞SGC7901一般在传代2到3天可以达到对数期。通过比较当前科研中所用的常规细胞保存方法如细胞保存液,乙醇,NaCl等,对细胞保存条件进行摸索,结果表明,在室温保存5天时间里,市售的细胞保存液和0.85% NaCl均有相当理想的保存效果。对细胞染色体进行核型分析。结果表明,胃癌细胞SGC7901适宜的秋水仙素浓度为0.02-0.4μg/mL,低渗时间在20-30min之间,胰酶消化时间为1.5min显带效果较适宜。胃癌细胞SGC7901的染色体为亚三倍体,一般在65条至68条不等,第4、11、16、17、21、22对共6对染色体类型与正常人染色体类型相比发生了明显的变化,说明胃细胞在癌变过程中染色体具有亚三倍体化的特点。采用MTT法、细胞核染色、琼脂糖凝胶电泳、流式细胞术等方法,研究了多糖对人胃癌细胞SGC7901的影响。结果表明,多糖通过诱导SGC7901细胞凋亡抑制细胞增殖,出现了明显的DNA ladder带和凋亡小体,并且这些作用呈浓度时间依赖性关系。为了进一步阐明多糖诱导SGC7901细胞凋亡的分子机理,我们利用Western blotting法检测多糖对Bcl-2、Bax蛋白表达的影响。研究显示,多糖浓度及处理时间条件性的抑制Bcl-2蛋白的表达,增强Bax蛋白的表达。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 第1章 绪论
• 1.1 动物细胞培养技术的发展及应用
• 1.1.1 动物细胞培养技术的发展
• 1.1.2 动物细胞培养技术的应用
• 1.1.3 动物细胞培养的分型
• 1.1.4 动物细胞培养的生长和增殖过程
• 1.2 胃癌
• 1.3 人胃癌细胞SGC7901 细胞培养
• 1.3.1 人胃癌细胞SGC7901 的培养条件
• 1.3.2 人胃癌细胞SGC7901 的培养过程
• 1.3.3 人胃癌细胞SGC7901 的生长特征
• 1.3.4 人胃癌细胞SGC7901 的注意事项
• 1.4 本文研究的主要内容和目的
• 1.4.1 研究的主要内容
• 1.4.2 研究目的
• 第2章 胃癌细胞SGC7901 生长条件
• 2.1 实验材料、试剂及仪器
• 2.1.1 材料
• 2.1.2 主要试剂
• 2.1.3 主要仪器
• 2.2 实验方法
• 2.2.1 RPMI1640 和DMEM 培养的细胞形态
• 2.2.2 流式细胞仪检测细胞状态
• 2.3 结果
• 2.3.1 RPMI1640 和DMEM 培养的细胞形态
• 2.3.2 流式细胞仪检测细胞状态
• 2.4 讨论
• 第3章 胃癌细胞SGC7901 生长曲线
• 3.1 实验材料、试剂及仪器
• 3.1.1 材料
• 3.1.2 主要试剂
• 3.1.3 主要仪器
• 3.2 实验方法
• 3.2.1 细胞生长曲线-计数法
• 3.3 结果
• 3.3.1 细胞生长曲线测定（计数法）
• 3.4 讨论
• 第4章 不同条件下细胞中DNA 完整性分析
• 4.1 材料
• 4.1.1 材料
• 4.1.2 试剂
• 4.1.3 仪器
• 4.2 实验方法
• 4.2.1 细胞培养
• 4.2.2 不同的细胞保存方法
• 4.2.3 DNA 提取
• 4.2.4 DNA 质量检测
• 4.3 结果
• 4.3.1 DNA 的纯度和浓度
• 4.3.2 不同保存方法保存2 天DNA 的电泳图
• 4.3.3 不同保存方法保存5 天DNA 的电泳图
• 4.4 讨论
• 第5章 细胞SGC7901 染色体核型分析
• 5.1 材料
• 5.1.1 材料
• 5.1.2 试剂
• 5.1.3 仪器
• 5.2 实验方法
• 5.2.1 细胞培养
• 5.2.2 染色体制片
• 5.3 结果
• 5.3.1 染色体制片结果
• 5.3.2 核型分析
• 5.4 讨论
• 第6章 多糖对人胃癌细胞株SGC7901 细胞凋亡的影响及其机制研究
• 6.1 材料
• 6.1.1 材料
• 6.1.2 试剂
• 6.1.3 仪器
• 6.2 实验方法
• 6.2.1 细胞培养
• 6.2.2 药物的配置
• 6.2.3 多糖对细胞增殖的影响
• 6.2.4 细胞形态学观察
• 6.2.5 DNA Ladder
• 6.2.6 流式细胞仪检测细胞凋亡
• 6.2.7 Western blotting 检测Bcl-2、Bax 表达变化
• 6.2.8 统计学处理
• 6.3 结果
• 6.3.1 多糖对细胞增殖的影响的结果
• 6.3.2 形态学观察结果
• 6.3.3 DNA 电泳结果
• 6.3.4 流式细胞仪检测细胞凋亡的结果
• 6.3.5 Western Blotting 的结果
• 6.4 讨论
• 论文结论
• 参考文献
• 致谢
• 附录A 攻读硕士学位期间发表的硕士论文目录