论文摘要
目的通过观察选择性环氧化酶2（COX-2）抑制剂Celecoxib和内皮素受体A拮抗剂BQ123分别及联合作用对人前列腺癌PC3、PC3M细胞体外增殖与凋亡的影响,初步探讨两药联合应用对激素非依赖性前列腺癌细胞的体外抗肿瘤效应。方法第一部分采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法观察Celecoxib和BQ123分别和联合作用于PC3及PC3M细胞时细胞的增殖能力的变化;通过划痕损伤实验观察Celecoxib和BQ123分别和联合作用于PC3及PC3M细胞时细胞的迁移能力的变化;通过细胞迁移实验观察Celecoxib和BQ123对人前列腺癌PC3、PC3M细胞的迁移和侵袭的抑制效应;第二部分利用Annexin V-FITC/PI双染色法和流式细胞术细胞周期实验检测Celecoxib和BQ123诱导肿瘤细胞凋亡的作用及其与细胞周期的关系。所有资料均应用SPSS 13.0软件进行分析处理,以p＜0.05作为检验标准。结果MTT法结果显示Celecoxib随着作用浓度和时间增加,对PC3、PC3M细胞的抑制率不断增加且表现出良好的量效关系和时效关系（p＜0.05）,在400μM时抑制率为100%表明细胞均已死亡。24小时对PC3、PC3M细胞半数抑制剂量（IC50）所需Celecoxib浓度约为50μM。BQ123对PC3、PC3M细胞的抑制率随着作用时间的延长也有明显的抑制效果（p＜0.05）。用低于IC50浓度的Celecoxib与BQ123联合作用于肿瘤细胞,结果表明其抑制作用约相当于100μM和200μMCelecoxib单药作用。说明联合用药抑制PC3、PC3M细胞增殖的作用强于单独用药（p＜0.05）。划痕损伤实验显示:100μM Celecoxib随着作用浓度和时间增加肿瘤细胞迁移距离均低于对照组（p＜0.05）。100μM Celecoxib联合1μMBQ123对肿瘤细胞迁移距离低于同浓度BQ123单药应用,与同浓度Celecoxib组相比有降低但不明显（p＞0.05）。表明100μM Celecoxib及联合用药对PCa细胞的细胞迁移有明显抑制作用（p＜0.05）,联合用药对细胞迁移的抑制作用较同浓度BQ123单药应用大（p＜0.05）。联合用药组比较同浓度Celecoxib对PC3M细胞迁移距离的抑制作用在72小时有统计学意义（p＜0.05）。细胞迁移实验显示:100μM Celeeoxib、1μM BQ123及100μM Celecoxib联合1μM BQ123作用于PC3、PC3M细胞时细胞侵入下室的细胞数对比对照组有明显减少（p＜0.05）。联合用药时侵入下室的细胞数比Celecoxib组单药组和BQ123单药组减少（p＜0.05）。表明100μM Celecoxib、1μM BQ123分别及100μM Celecoxib联合1μM BQ123对PCa细胞的迁移和侵袭能力有明显抑制作用。联合用药的作用较单药应用大。Annexin V-FITC/PI双染色检测实验的表明:Celecoxib和BQ123均可诱导PCa细胞凋亡,1μM BQ123诱导PCa细胞凋亡的能力较弱,100μM Celecoxib诱导细胞凋亡的效果更为明显。两药联合作用诱导细胞凋亡的作用比各单药作用效果更好细胞周期实验结果表明:在PC3、PC3M细胞中加入100μM Celecoxib或联合应用100μM Celecoxib和1μM BQ123后G0/G1期细胞比例比较对照组明显增加,S期细胞比例比较对照组明显减少（p＜0.05）,说明用药后细胞分裂阻滞在G0/G1期。BQ123组与对照组相比各细胞周期时相细胞比例与对照组相比未见明显变化（p＞0.05）,联合用药组细胞比例与100μM Celecoxib组相比较也未见明显变化（p＞0.05）,说明BQ123对PCa细胞的细胞周期作用不明显。结论:选择性环氧化酶2抑制剂Celecoxib和内皮素受体A拮抗剂BQ123均能在体外细胞实验水平显著抑制PC3、PC3M细胞的增殖、迁移和侵袭作用,两药联合的作用比各单药作用大;Celecoxib和BQ123均可诱导细胞凋亡,两药联合的诱导凋亡作用比各单药作用大;Celecoxib作用于肿瘤细胞G0/G1期,BQ123对细胞周期的作用不明显。
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