塞来昔布对胃癌细胞耐药性的影响及其机制研究

论文摘要

背景和目的:肿瘤细胞耐药的出现是导致化疗失败的主要原因,在众多耐药机制中,肿瘤细胞对凋亡抵抗是其重要因素之一。化疗可引起核因子κB（NF-κB）的转录活性增加,活化的NF-κB可调节凋亡抑制蛋白（IAPs）家族成员表达上调。这一传导通路的改变可能是诱导肿瘤细胞产生凋亡抵抗继发耐药的途径之一。Livin、Survivin是近年发现的IAPs家族新成员,具有较强的抗凋亡作用,参与肿瘤的发生和发展。在肿瘤产生继发耐药的过程中,是否有NF-κB活化及Livin、Survivin的共同参与,目前尚不清楚。胃癌是我国高发的恶性肿瘤,化疗是其重要的治疗手段,然而胃癌化疗往往因耐药而导致最终治疗失败,耐药问题是临床亟待解决的难题之一。特异性环氧化酶-2（COX-2）抑制剂塞来昔布是临床常用的NSAIDs类解热镇痛抗炎药,对结直肠癌、胃癌等多种恶性肿瘤细胞具有抑制作用,能抑制肺癌细胞中NF-κB的核转位而抑制其转录活性。对于塞来昔布能否通过抑制化疗后NF-κB的活性,阻断Livin、Survivin的凋亡抑制,增加胃癌细胞对化疗药物的敏感性,目前尚未见相关文献报道。本研究以胃腺癌细胞株SGC7901及其耐药株SGC7901╱VCR为研究对象,检测NF-κB、Livin、Survivin在两株细胞中的表达;并检测分析应用塞来昔布干预后,两株细胞增殖和凋亡的变化以及NF-κB、Livin和Survivin的表达情况。探讨NF-κB、Livin、Survivin在胃癌细胞耐药形成过程中的可能作用,以及塞来昔布可否增敏化疗、逆转耐药的作用及其可能的作用机制。方法:1.体外培养胃腺癌细胞SGC7901及其耐药细胞SGC7901╱VCR。2.MTT法检测药物（VCR、塞来昔布）干预后上述两株胃癌细胞的增殖情况。3.应用ELISA法测定上述两株细胞中NF-κB核转录活性。4.Western blot方法检测Livin、Survivin在SGC7901,SGC7901/VCR细胞中的表达,以及塞来昔布和塞来昔布联合VCR对上述两株细胞Livin、Survivin及NF-κB表达的影响。5.流式细胞术分析两株细胞经VCR或/和塞来昔布干预后的凋亡率的变化。结果:1.SGC7901细胞与SGC7901╱VCR细胞对VCR的药物敏感性不同,VCR对后者的增殖抑制作用明显减弱,诱导细胞凋亡减少。2.SGC7901╱VCR细胞核内NF-κB p65蛋白表达（0.404±0.025）较SGC7901细胞（0.301±0.016）显著增多（P＜0.01）,表明NF-κB活性增强;Livin、Survivin的表达在SGC7901╱VCR细胞中均发生上调（P＜0.05）。3.塞来昔布对上述两株细胞具有增殖抑制作用,塞来昔布作用SGC7901╱VCR细胞后Livin、Survivin的表达呈剂量、时间依赖性下调趋势。4.塞来昔布联合VCR对Livin、Survivin具有协同抑制作用,并对SGC7901/VCR细胞的增殖抑制作用增强,诱导细胞凋亡增加。结论:1.NF-κB活化及Livin、Survivin表达上调可能是胃癌细胞产生继发耐药的机制之一,Livin、Survivin表达上调可能与NF-κB活化有关。2.塞来昔布可下调胃癌细胞Livin、Survivin的表达,增加SGC7901╱VCR细胞对VCR的敏感性,诱导细胞凋亡增加,这可能是塞来昔布逆转SGC7901/VCR对VCR耐药的机制之一。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 引言
• 第一部分:NF-κB活化及Livin、Survivin表达上调与胃癌细胞耐药的关系
• 材料与方法
• 结果
• 第二部分:塞来昔布对胃癌细胞耐药性的影响及其机制的研究
• 材料和方法
• 结果
• 讨论
• 小结
• 参考文献
• 附图
• 致谢
• 综述
• 参考文献