论文题目: PRRSV对猪肺泡巨噬细胞天然免疫功能影响的分子机制
论文类型: 博士论文
论文专业: 预防兽医学
作者: 蒲静
导师: 杨汉春
关键词: 猪繁殖与呼吸综合征病毒,猪肺泡巨噬细胞,模式识别受体,干扰素激活相关基因,细胞因子
文献来源: 中国农业大学
发表年度: 2005
论文摘要: 猪繁殖与呼吸综合征是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)引起的以母猪繁殖障碍和仔猪呼吸道疾病为特征的病毒性疾病。本研究通过分析PRRSV感染后肺泡巨噬细胞(PAM)的模式识别受体、干扰素激活相关基因及细胞因子的mRNA转录动态,从天然免疫的角度系统分析了PRRSV感染对PAM免疫功能的影响。 用RT-PCR技术从PAM中扩增和克隆了猪模式识别受体(PRR)CD16、CD18、TLR2、TLR4和SR,天然免疫功能相关分子Nramp1、SP-A,干扰素激活相关基因(ISG)OAS、PKR、Mx1,以及猪细胞因子IFN-α和IL-6基因,经测序鉴定后,利用反向PCR技术构建了相应的缺失cDNA竞争分子。通过竞争PCR方法,建立了各种分子的标准竞争曲线和直线回归方程。 用竞争定量RT-PCR技术检测PRRSV感染后PAM模式识别受体CD16、CD18、SR、TLR2、TLR4和天然免疫功能相关分子SP-A、Nramp1 mRNA的转录动态。体外感染试验结果显示,PAM的PRR和SP-A、Nramp1的mRNA均在感染后4h急剧下降到最低转录水平,随后逐渐升高,到感染后48h全部恢复正常,表明各功能分子在PRRSV感染早期mRNA的转录受到抑制,造成PAM天然免疫功能下降。体内感染试验结果表明,在PRRSV感染前期(3～14天),肺泡巨噬细胞PRR和SP-A、Nramp1 mRNA转录受到不同程度的抑制,说明PRRSV感染早期可导致PAM天然免疫功能下降;在感染后期(28～42天),各功能分子的mRNA转录水平恢复正常或表达上调,提示PAM天然免疫功能有所恢复并提高。 采用竞争定量RT-PCR检测PRRSV感染后PAM的干扰素激活相关基因OAS、PKR、Mx1的mRNA转录动态。体外感染试验结果显示,OAS、PKR、Mx1 mRNA转录水平始终低于对照组,表明在PRRSV感染过程中干扰素激活相关基因的转录始终受到抑制,导致PAM的抗病毒能力降低;体内感染试验结果显示,ISG在接种后3～7天没有明显变化,在接种后14天mRNA转录水平迅速下降到最低点,表明PRRSV感染后2周ISG基因转录受到严重抑制,导致PAM抗病毒功能下降;到接种后28～42天,ISG恢复正常并略有升高。 利用竞争定量RT-PCR检测PRRSV感染后PAM中细胞因子IFN-α、IL-6、IL-1β、TNF-α、IL-8、MCP-1、IL-10、IL-12p40、IL-18、GM-CSF及IEN-γ的mRNA转录动态,同时,采用定量ELISA检测PAM培养上清中IFN-α、IL-6、IL-10和IL-12的蛋白浓度。体外试验结果表明,在感染早期促炎性细胞因子表达上调,各细胞因子的上调幅度和形成转录高峰时间有所不同,表明PRRSV体外感染可引起PAM的炎症反应。体内试验结果表明,在感染早期(3～7天),促炎性细胞因子IFN-α、IL-6、IL-1β、TNF-α、IL-8等mRNA转录有不同程度的下降;在感染中期(14天),IL-10的mRNA转录持续升高,而Th1型细胞因子IL-12、IL-18和GM-CSF转录下调,表明PRRSV感染后PAM的免疫调节功能受损,引起免疫抑制;在感染后期(28～42天),IFN-α、IL-6、IL-12、IL-18和IFN-γ等转录升高,表明PAM免疫调节功能有所恢复。对PAM培养上清中IFN-α、IL-6、IL-10和IL-12的蛋白检测结果表明这些因子的蛋白表达变化与mRNA转录动态基本一致。
论文目录:
摘要
Abstract
插图与附表清单
缩略词表
第一章 引言
1.1 国内外研究现状
1.2 研究目的与意义
1.3 研究内容与技术路线
1.4 研究目标
第二章 猪肺泡巨噬细胞模式识别受体、天然免疫功能相关分子和细胞因子标准竞争曲线的构建
2.1 前言
2.2 材料与方法
2.3 结果与分析
2.4 讨论
2.5 小结
第三章 PRRSV对猪肺泡巨噬细胞模式识别受体mRNA转录的影响
3.1 前言
3.2 材料与方法
3.3 结果与分析
3.4 讨论
3.5 小结
第四章 PRRSV对猪肺泡巨噬细胞干扰素激活相关基因mRNA转录的影响
4.1 前言
4.2 材料与方法
4.3 结果与分析
4.4 讨论
4.5 小结
第五章 PRRSV对猪肺泡巨噬细胞中细胞因子表达的影响
5.1 前言
5.2 材料与方法
5.3 结果与分析
5.4 讨论
5.5 小结
第六章 结论
第七章 创新点
第八章 文献综述
肺泡巨噬细胞的天然免疫研究进展
8.1 天然免疫的"分子模式识别作用"及其免疫学生物意义
8.2 干扰素激活相关基因研究进展
8.3 细胞因子对肺泡巨噬细胞的免疫调节作用
参考文献
致谢
附录
作者简介
发布时间: 2005-07-18
参考文献
- [1].猪圆环病毒2型感染对猪肺泡巨噬细胞功能的影响[D]. 周双海.中国农业大学2004
- [2].副猪嗜血杆菌感染猪肺泡巨噬细胞的转录组学研究与环介导恒温扩增法的建立[D]. 汪洋.华中农业大学2012
- [3].PRRSV下调猪肺泡巨噬细胞SLAⅠ类分子的机制[D]. 杜吉革.中国农业大学2015
- [4].猪流感病毒增强猪链球菌2型对猪气管上皮细胞和肺泡巨噬细胞的继发感染及其机制研究[D]. 王英超.吉林大学2013
- [5].脂多糖（LPS）诱导绵羊肺泡巨噬细胞cDNA文库的构建、EST分析和免疫相关基因的研究[D]. 盛金良.石河子大学2008
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