成人骨髓基质细胞的体外培养和鉴定

论文摘要

骨髓是一个具有多种细胞成分的复杂器官,有造血及成骨能力。骨髓细胞的成骨能力来源于骨髓基质系统的基质干细胞（Stromalstem cell）,在体外,骨髓基质细胞的成骨作用已得到肯定。由于骨髓具有取材方便、对机体损伤小的特点,成为骨组织工程最有应用前景的种子细胞。但骨髓基质细胞具有多分化潜能,且有多种成分,因此,骨髓基质细胞的纯化和对其定向诱导分化为成骨细胞,是其应用于骨组织工程的前提。本实验是在动物实验的基础上,探讨一种通过换液纯化骨髓基质细胞,使用不同浓度地塞米松以寻找一对骨髓基质细胞的增殖和分化均较适宜的浓度,并在适宜浓度的条件培养基条件下使其定向分化,旨在建立一种简便易行的成人骨髓基质细胞体外培养方法,为进一步研究成骨细胞及骨组织工程提供技术平台。 目的:建立一种成人骨髓基质细胞在体外培养条件向成骨细胞转化的方法,探讨简易的成人成骨细胞体外培养方法,为进一步研究成骨细胞及骨组织工程提供技术平台。 方法:手术中抽取健康成人骨髓组织,采用全骨髓培养法在体外进行培养,细胞汇合后改用含不同浓度地塞米松的培养基培养后观察细胞的增殖和分化情况。再采用适宜浓度地塞米松、β-甘油磷酸钠和维生素C的条件培养基进行传代培养,观察细胞增殖和分化情况,并对细胞进行鉴定。 结果:通过对不同浓度地塞米松对骨髓基质细胞增殖与分化的影响观察,认为10-8mol/L的浓度为比较合适的浓度。并采用全骨髓法在体外培养的成人成骨细胞表现成骨细胞的形态特征,细胞ALP阳性

论文目录

• 中文摘要
• Abstract
• 前言
• 资料与方法
• 1 实验室的准备
• 1.1 准备室的设备
• 1.2 无菌操作
• 1.3 细胞培养用液的配制与消毒器材与试剂
• 2 材料来源
• 3 细胞培养
• 3.1 原代培养
• 3.2 不同浓度地塞米松中细胞增殖测定
• 3.3 细胞分化测定
• 3.4 传代培养
• 4 形态学观察
• 4.1 相差显微镜观察
• 4.2 组织学观察
• 4.3 透射电镜观察
• 5 生物学特性检测
• 5.1 绘制细胞生长曲线
• 5.2 碱性磷酸酶活性检测
• 5.3 细胞形成钙结节能力检测
• 6 统计方法
• 结果
• 讨论
• 小结
• 致谢
• 参考文献
• 附图
• 综述一
• 综述二
• 攻读硕士学位期间发表的学术论文