Ndrg2相互作用分子筛选及其在NB4白血病细胞分化中表达相关性的研究

论文题目: Ndrg2相互作用分子筛选及其在NB4白血病细胞分化中表达相关性的研究

论文类型: 博士论文

论文专业: 生物化学与分子生物学

作者: 张璟

导师: 药立波,刘新平

关键词: 酵母双杂交,串连亲和层析,早幼粒白血病细胞,细胞分化

文献来源: 第四军医大学

发表年度: 2005

论文摘要: NDRG2(N-myc down-stream regulated gene 2)是我们在1999年发现的一个NDRG基因家族的新成员。NDRG家族序列在进化中高度保守,成员之间高度同源,提示该基因家族具有重要的生物学功能。生物信息学分析未发现NDRG2及其家族其它成员具有任何已知的结构域或基序。目前关于NDRG2的具体功能尚不清楚。但初步的研究已经表明NDRG2在抑制肿瘤生长,参与应激反应等生命活动中有一定作用。如能找到与之相互作用的蛋白分子,会对其功能研究提供有用的线索。研究相互作用蛋白的方法有多种,应用最广泛的是酵母双杂交,尤其是对功能未知的蛋白。为深入探讨NDRG2的功能,我们以Ndrg2为诱饵用酵母双杂交方法筛选了成人脑cDNA文库,获得了12个阳性克隆,分别代表5种基因。筛选获得的5种基因片段包括①与分化相关的FHOS(forming homologue overexpression spleen)分子片段。②与肿瘤的非锚着依赖生长恶性表型关系密切的MSP58(58-KDa microspherule protein)基因片段,该分子另有两个亚型-MCRS1(Microspherule protein 1)和MCRS2(Microspherule protein 2),我们所筛到的片段为三个分子C末端共同序列。将其命名为MCRS2-C。③一个编码假想蛋白的基因片段。④一个随机的cDNA克隆。⑤编码Syntaxin 1A蛋白的mRNA3’端的一段非编码序列。我们对酵母双杂交筛选到的阳性分子MCRS2-C与Ndrg2的相互作用进行了深入的研究。应用GST-Pulldown及免疫共沉淀方法在体外及细胞内验证了MCRS2-C与Ndrg2的物理相互作用。进一步构建了Ndrg2与红色

论文目录:

缩略语表

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英文摘要

前言和文献回顾

正文

第一部分酵母双杂交方法筛选Ndrg2相互作用分子

1.1 实验材料和主要仪器

1.2 实验方法

1.3 实验结果

1.4 讨论

第二部分 Ndrg2特异的哺乳动物TAP系统的建立

2.1 实验材料和主要仪器

2.2 实验方法

2.3 实验结果

2.4 讨论

第三部分 NDRG2在NB4白血病细胞分化中表达相关性的研究

3.1 实验材料和主要仪器

3.2 实验方法

3.3 实验结果

3.4 讨论

小结

参考文献

致谢

发布时间: 2005-07-19

参考文献

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Ndrg2相互作用分子筛选及其在NB4白血病细胞分化中表达相关性的研究

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