春剑花梗离体培养中褐化的研究

论文摘要

研究春剑(Cymbidum.longibracteatum)花梗组培褐化的影响因素及控制方法,尽量延长花梗在培养基中的成活时间,是成功建立春剑花梗快繁体系的关键一步。外植体褐化除了受内因——外植体的节位、节数、花梗成熟度的影响外,还受外因——母株的生长环境、取材月份、外植体的接种方式、抗氧化剂、吸附剂、切口封闭、暗培养、热激、Fe盐等多种因素的影响。本研究对影响春剑花梗褐化的多种内、外因素进行了较系统的研究,结果表明:1.在外植体大小、摆放方式对褐化影响方面:中节、顶节的单节外植体,带苞叶、半嵌入培养基放置或者不带苞叶、平放于平面培养基以及多节花梗、带苞叶,极性放置、半嵌入斜面培养基这三种组合方式都可以有效减轻褐变,保持外植体鲜活。带苞叶的外植体接种后15～20d去除苞叶,外植体鲜活度高。2.在取材月份与外植体生长环境方面:2月份取花梗未全部伸长,节间紧缩,花梗苞叶包裹,花萼未展开的带菌少的健康无病虫害花梗为外植体,可以有效减轻褐化。3.在吸附剂处理的防褐方面:花梗的褐化率随着活性炭、PVP浓度的增加而增加。防褐效果不理想,甚至加剧外植体褐变。4.在抗氧化剂处理防褐方面:抗坏血酸和柠檬酸防褐效果好,它们抗褐化的最佳浓度分别为2g/L,5g/L。硫代硫酸钠防褐效果不理想。5.切口封闭处理为本次试验中防褐最佳的处理,切口封闭处理延长了外植体完全褐化的时间,其中医用凡士林封闭效果优于石蜡封闭。6.就低氨态氮的改良1/2MS培养基的效果最佳,MS、1/4MS效果都差。7.56℃15S的热激处理,可以有效降低切口端褐变,但是温度超过56℃后,随着温度的增加,处理时间的增长,反而加剧了切口的水渍化,加速了褐变。8.2倍Fe盐促使花梗变绿,延长在培养基中的存活时间。但4倍Fe盐大大增加褐化率。9.暗培养20d可以有效减轻褐化。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 1 文献综述
• 1.1 中国兰组织培养研究概况
• 1.1.1 中国兰种子无菌育苗
• 1.1.2 中国兰茎尖、芽组织培养研究
• 1.1.3 中国兰根状茎的组培研究
• 1.1.4 中国兰花梗的组织培养研究
• 1.1.5 中国兰其它外植体的组培研究
• 1.2 植物组织培养褐化问题的研究概况
• 1.2.1 褐化现象
• 1.2.2 褐变机理
• 1.2.3 影响褐化的因素
• 1.2.4 控制褐化的方法
• 2 本研究的目的和意义
• 3 材料和方法
• 3.1 实验材料
• 3.2 主要仪器及药品
• 3.3 实验方法
• 3.3.1 不同生长环境的外植体的褐化情况
• 3.3.2 外植体取材月份对褐化的影响
• 3.3.3 花梗成熟度度对褐化的影响
• 3.3.4 不同材料部位、大小及摆放方式对外植体褐化的影响
• 3.3.5 外植体切口封闭对褐化的影响
• 3.3.6 不同吸附剂对褐化的影响
• 3.3.7 不同抗氧化剂对褐化的影响
• 3.3.8 不同的基础培养基与激素组合对褐化的影响
• 3.3.9 Fe盐对外植体褐化的影响
• 3.3.10 热激处理对褐化的影响
• 3.3.11 暗培养对褐化的影响
• 3.4 培养条件
• 3.5 试验结果观察与数据统计分析
• 4 结果与分析
• 4.1 不同生长环境下外植体的褐化情况
• 4.2 取材月份对褐化的影响
• 4.3 花梗成熟度对褐化的影响
• 4.4 材料部位、大小及摆放方式对外植体褐化的影响
• 4.5 切口封闭对褐化的影响
• 4.6 吸附剂对外植体褐化的影响
• 4.7 抗氧化剂对褐化的影响
• 4.8 不同基础培养基及生长调节剂对褐化的影响
• 4.9 Fe盐对外植体褐化的影响
• 4.10 热激对外植体褐化的影响
• 4.11 暗培养时间对褐化的影响
• 5 讨论
• 5.1 不同生境、月份、成熟度的外植体对褐化的影响
• 5.2 外植体部位、节数、大小及摆放方式对外植体褐化的影响
• 5.3 切口封闭对褐化的影响
• 5.4 吸附剂对外植体褐化的影响
• 5.5 抗氧化剂对褐化的影响
• 5.6 不同基础培养基及激素组合对褐化的影响
• 5.7 Fe盐、热激、暗培养对外植体褐化的影响
• 6 问题和下一步工作建议
• 参考文献
• 致谢
• 图版