论文摘要
六味地黄汤是中医滋阴补肾的经典名方,出自《小儿药证直诀》,由熟地黄、山茱萸、山药、泽泻、茯苓、牡丹皮组成,其组方严谨,配伍得当,疗效确切,在临床上得到广泛的应用。本文以六味地黄汤为研究对象,从六味地黄汤的质量控制以及有效成分在大鼠体内的药代动力学两方面进行研究:建立了六味地黄汤的指纹图谱,并对其中五种有效成分的含量进行了同时测定,为六味地黄汤的质量控制提供了定性和定量的依据;多次i.g给予大鼠六味地黄汤,确定其吸收入血成分,同时建立了大鼠血浆中莫诺苷和马钱苷的测定方法,通过i.g给予大鼠六味地黄汤、三补汤、一补一泻汤,测定莫诺苷和马钱苷的血药浓度,计算药代动力学参数,探讨有效成分在体内的动态变化规律,为临床用药提供科学依据。主要研究内容包括以下三个方面:一、六味地黄汤的质量控制研究建立了六味地黄汤的指纹图谱和多种成分同时测定的HPLC法,并测定了六味地黄汤中多糖含量,为更好的控制六味地黄汤的内在质量提供了定性和定量的科学依据。六味地黄汤的指纹图谱中共得到19个共有峰,其中5个成分经对照品对照,鉴定为没食子酸、莫诺苷、马钱苷、芍药苷和丹皮酚,并建立了5种成分含量测定的方法;通过与相同色谱条件下单味药材色谱的比对,确定了六味地黄汤中19个共有峰的归属,主要来自于山茱萸、牡丹皮和熟地黄药材,其中2、8、12、14号峰为山茱萸药材与牡丹皮药材共有。本文通过不同配伍组中五种物质的含量的比较,对六味地黄汤煎煮过程成分溶出规律进行了初步研究。莫诺苷、马钱苷、芍药苷、丹皮酚的含量在六味地黄汤全方组中为最高,其他配伍组均低于全方组,提示各味药材的配伍能促进单味药材中成分的溶出。牡丹皮中没食子酸在单味药材煎煮含量较低,在与除山茱萸药材的其他配伍组中含量较高,在含有山茱萸的配伍组中含量则略有降低,提示其他药味可促进牡丹皮中没食子酸的溶出,而山茱萸药材在一定程度上呈抑制作用。多糖成分也为六味地黄汤的有效成分,本文用蒽酮-硫酸法测定了六味地黄汤中多糖的含量。二、六味地黄汤不同配伍对血清入血成分的影响本文对六味地黄汤在大鼠体内吸收入血成分进行研究,确定了莫诺苷和马钱苷为六味地黄汤i.g给药后能以原型入血的成分,并建立了同时测定大鼠血清中莫诺苷和马钱苷的分析方法。莫诺苷在0.254～102μg/ml的范围内,峰面积与血清浓度之间呈良好的线性关系（r=0.9998）,日内和日间精密度的RSD%均小于15%;马钱苷在0.579～232μg/ml的范围内,峰面积与血清浓度间呈良好的线性关系（r=0.9998）,日内和日间精密度的RSD%均小于15%,符合生物样品的分析要求。本文选用6只大鼠为一组,累计多次灌胃给予大鼠六味地黄汤、一补一泻汤、三补汤后,分别于1、2、3h取血清进行分析,测定莫诺苷和马钱苷的血药浓度,提示全方组对莫诺苷和马钱苷的吸收有一定程度的促进作用。三、大鼠血浆中莫诺苷和马钱苷的药代动力学研究建立了大鼠血浆中同时测定莫诺苷和马钱苷的HPLC定量分析方法。大鼠血浆以甲醇沉淀蛋白去除杂质,N2气吹干甲醇复溶后进样,测定大鼠血浆中莫诺苷和马钱苷的浓度,莫诺苷和马钱苷分离度佳,内源性物质不干扰测定。莫诺苷浓度在0.01021～10.21μg/ml范围内,峰面积与血浆浓度间呈良好的线性关系（r=1.000）,提取回收率大于70%,日内和日间精密度均小于5%;马钱苷浓度在0.006325～6.325μg/ml内,峰面积与血浆浓度间呈良好的线性关系（r=1.000）,提取回收率大于80%,日内和日间精密度均小于5%,此方法具有灵敏、专一的特点,符合生物样品的分析要求。本文选用16只大鼠,以六味地黄汤、一补一泻汤、三补汤分别单次灌胃（i.g.）给药,其中六味地黄汤和三补汤大鼠血浆中莫诺苷和马钱苷血药浓度-时间曲线符合一级吸收的一室模型,而一补一泻汤大鼠血浆中的莫诺苷和马钱苷血药浓度-时间曲线符合一级吸收的二室模型;通过药代动力学参数的研究,进一步研究六味地黄汤的体内过程,为临床应用提供更加科学的依据。对大鼠血浆和尿液中发现了2个代谢产物M1、M2,采用高效液相色谱制备分离方法,得到纯化部位,经HPLC-DAD、LC-MS分析鉴定,初步推测代谢产物M1可能的分子离子峰[M+H]+为341,[M+Na]+为364;代谢产物M2可能的分子离子峰[M+H]+为272,具体结构的确定还需采用NMR等方法进一步研究。
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