抗CD5单克隆抗体诱导人CD5+B1细胞凋亡的研究

论文摘要

目的:观察抗CD5单克隆抗体诱导人CD5+B1细胞凋亡的作用,分析细胞内Mcl-1、Bcl-2和Bax蛋白的基因表达水平,探讨抗CD5单克隆抗体诱导其凋亡的分子机制,为将其应用于治疗CD5+B1细胞肿瘤和相关的自身免疫病奠定基础。方法:1.套细胞淋巴瘤jeko-1细胞株的培养和冻存:套细胞淋巴瘤jeko-1细胞株用含20%灭活胎牛血清的RPMI-1640常规培养。加入含10%DMSO的完全培养基,冻存于液氮罐中。2.流式细胞术检测抗CD5单克隆抗体诱导jeko-1细胞株凋亡的情况,同时与TNF-α诱导jeko-1细胞凋亡和jeko-1细胞株自然凋亡相比较。将细胞株分为3组,调整细胞浓度为1×106/ml,分别加入抗CD5单克隆抗体（100μg/ml）和TNF-α（600 ng/ml）和完全培养基,分别培养至24 h、48 h、72 h收获细胞,用PBS洗涤2次。按照试剂说明加入annexinv/PI试剂。用流式细胞仪检测凋亡情况,实验重复3次。3.实时荧光定量（Real time Quantitative PCR）RTQ-PCR测定jeko-1细胞凋亡后胞内Mcl-1、Bcl-2、Bax的mRNA的表达水平:设抗CD5单克隆抗体诱导细胞凋亡实验组,TNF-α诱导细胞凋亡阳性对照组,自然凋亡对照组,每组分为目的基因组和内参照GAPDH组,共12组。于加制剂后第48 h收获细胞,提取细胞总RNA并反转录成cDNA。按照SYBR qPCR Mix试剂盒说明书进行Mcl-1、Bcl-2和Bax及GAPDH的实时荧光定量PCR反应。每份标本同时检测Mcl-1、Bcl-2、Bax以及内参照GAPDH,并设一个双蒸水空白对照组和标准品组。根据相对定量公式（2-△△ct×100%）计算Mcl-1、Bcl-2和Bax基因相对表达量。实验重复3.次。4.统计学分析,用SPSS11.5软件统计包完成。P < 0.05或P < 0.01为差异有统计学意义。结果:1.流式细胞术分析细胞凋亡率,显示抗CD5单克隆抗体诱导组凋亡率显著高于TNF-α诱导组及自然凋亡组,差异有统计学意义（ P < 0.05）,凋亡率随时间的延长而增高。2.将诱导凋亡48 h后收获的CD5+B1细胞进行RTQ-PCR检测,CD5单抗诱导组与TNF-α诱导组和自然凋亡组相比,仅出现Bcl-2表达降低,差异具有统计学意义（P < 0.05）,Bax、Mcl-1的变化无统计学意义（P > 0.05）;CD5单抗诱导组中Bcl-2/Bax比值相对于TNF-α诱导组及自然凋亡组有所降低（P < 0.01）,差异有统计学意义。结论:1.抗CD5单克隆抗体诱导CD5+B1细胞凋亡效果显著,可望用于相关临床疾病的治疗。2.Bcl-2家族与CD5单抗诱导CD5+B1细胞凋亡发生有关:在凋亡发生时Bcl-2基因表达下调,Bax和Mcl-1基因表达无变化。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 前言
• 材料与方法
• 结果
• 讨论
• 结论
• 参考文献
• 英汉缩略词对照表
• 致谢
• 综述
• 参考文献