论文摘要
目的:缺氧诱导因子在细胞低氧应答中具有核心地位,其表达可受到上游激活途径PI3K（phosphatidylinositol 3 kinase）、Akt（protein kinase B,PKB）的正调控和降解途径中林希氏基因（von Hippel-Lindau gene,VHL）、抑癌基因p53（tumor suppressorgene p53,p53）负调控。羟基红花黄色素A（Hydroxysafflor yellow A,HSYA）是从菊科植物红花中提取得到的查尔酮类化合物。本实验旨在探讨羟基红花黄色素A促低氧损伤血管内皮细胞中缺氧诱导因子表达上调的机制。方法:应用1H-NMR检测MCAO大鼠脑皮层中内源性小分子变化;采用MTT法观察低氧状态下HSYA(100μmol·L-1,10μmol·L-1,1μmol·L-1)对人脐静脉内皮细胞株（Eahy926）增殖率的影响;免疫组织化学方法测定缺氧诱导因子-1α（hypoxiainducible factor 1α,HIF-1α）、VHL与p53蛋白表达数量和定位;RT-PCR方法检测细胞中VHL,p53、PI3K、PTEN（phosphatase and tensin homolog deleted onchromosome ten）和HIF-1α的转录水平;Western blotting方法检测VHL,p53、PI3K、Akt、PTEN和HIF-1α蛋白表达;应用高效液相色谱检测HSYA在细胞內外的含量变化。结果:经过PLS-DA方法分析,与假手术组、模型组相比,HSYA可以下调脑缺血大鼠脑皮层中的乳酸水平,上调葡萄糖水平;与低氧模型组相比,HSYA(100μmol·L-1)可以使细胞增殖率升高,HIF-1α转录和蛋白表达水平显著增强,呈时间依赖性;HSYA(100μmol·L-1)显著下调VHL、p53、PTEN转录与蛋白表达水平,上调PI3K与Akt的表达,并且HSYA对各因子的调节具有一定的时序关系。HSYA在常氧状态和低氧状态下都未发现其进入细胞内。结论:HSYA可以对MCAO大鼠脑皮层中能量代谢相关的內源性小分子化合物具有有益的调节作用。HSYA在低氧状态下对血管內皮细胞具有保护作用,这一作用与其诱导HIF-1α表达增加相关;HSYA可能上调HIF-1α上游调控因子PI3K、Akt的表达,并下调该通路抑制因子PTEN表达;在降解通路中HSYA下调VHL、p53的表达也可部分影响HIF-1α表达上调。HSYA不能进入细胞膜,因此其对细胞内信号调节的作用可能具有其他的机制。HSYA对细胞内信号的调控机制非常复杂,还有待更进一步的实验探讨。
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标签：羟基红花黄色素论文; 缺氧诱导因子论文; 林希氏基因论文; 抑癌基因论文; 磷酸肌醇激酶论文; 蛋白激酶论文; 人脐静脉内皮细胞株论文;