CARM1和NF-κB在哮喘豚鼠中的表达变化及地塞米松的干预作用

论文摘要

支气管哮喘是一种由遗传和环境因素共同驱动的常见呼吸系统慢性炎症性疾病,涉及多种前炎症介质的转录调控。哮喘的本质是慢性气道炎症,尽管哮喘病程可表现为急性发作期和缓解期,但气道的炎症始终存在,消除或控制气道炎症是治疗哮喘的关键,因此我们必需深入研究气道炎症发生发展的机制。NF-κB在多种免疫和炎症应答有关的基因转录调控中起关键作用,NF-κB的p50和c-Rel亚基都被鉴定为哮喘性呼吸道炎症的关键分子。CARM1是一个NF-κB依赖的转录共激活因子,发挥启动子特异的募集NF-κB到染色质的调节因子功能。CARM1可能主要通过增强募集NF-κB到相关位点激活NF-κB信号转导通路,启动了多种前炎性基因和免疫调节基因的转录,在免疫和炎症应答有关的基因转录调控中起关键作用。NF-κB依赖的基因亚群需要CARM1诱导, CARM1是一个必需的NF-κB共激活因子。CARM1催化组蛋白H3的Arg 2, Arg 17和Arg 26甲基化,精氨酸甲基化参与信号转导、转录调控、染色质重塑、凋亡等多种细胞事件具有广泛的生物学功能。CARM1和NF-κB在哮喘中的作用机制尚不清楚,本实验通过制备OVA豚鼠哮喘模型,探讨CARM1和NF-κB在哮喘中的表达变化及地塞米松的干预作用,从前炎症介质转录调控的角度阐述CARM1和NF-κB在哮喘发病机制中可能的作用。方法40只白色雄性豚鼠随机分为三组:①正常对照组;②哮喘组;③地塞米松治疗组。以OVA致敏OVA激发建立哮喘模型;正常对照组以同等剂量的生理盐水代替OVA;地塞米松治疗组在每次抗原激发后腹腔注射地塞米松,余同模型组。最后一次激发24小时后灌注取材,冰冻切片HE染色普通光学显微镜观察病理变化,然后采用间接免疫荧光法检测气道及肺组织CARM1和NF-κB （P65）的表达。每个样本在镜下随机计数10个400倍视野,计算每400倍视野平均阳性细胞个数,每组表达水平用样本均数±标准差（ X±S）表示,正常对照组、哮喘组和地塞米松治疗组样本均数组间两两比较采用Dunnett T3检验。结果CARM1和NF-κB（P65）在对照组,哮喘组,地塞米松治疗组均有阳性表达,主要在气道及肺组织表达,在哮喘组[（123.75±41.55）和（126.92±46.74）个/400倍视野]及地塞米松治疗组[（84.33±27.70）和（85.00±29.22）个/400倍视野]较对照组[（51.67±8.29）和（52.75±9.07）个/400倍视野]显著高表达,地塞米松治疗组表达较哮喘组低,样本均数组间两两比较差异均有统计学意义。结论CARM1和NF-κB（P65）在哮喘豚鼠气道及肺组织高表达,提示CARM1可能通过增强募集NF-κB到染色质的相应位点激活NF-κB信号转导通路,启动了多种前炎性基因和免疫调节基因的转录激活,从而诱发哮喘炎症反应。CARM1和NF-κB参与前炎症介质的转录调控,是哮喘发生发展的重要分子机制之一。地塞米松可下调气道及肺组织CARM1和NF-κB的表达,部分阻断前炎症介质的产生减轻哮喘炎症反应,其确切机制有待进一步研究。

论文目录

• 缩略语表
• 中文摘要
• ABSTRACT
• 前言
• 文献回顾
• 一、哮喘定义及概况
• 二、主要基于2006 年版GINA的哮喘发病机制
• （1） 免疫调节机制
• （2） 气道重塑
• （3） ERK1／2 信号通道可能在慢性哮喘气道重塑中的作用
• （4） 气道树突状细胞（DC）与免疫反应
• （5） 神经机制在哮喘发病机制中的作用
• （6） 哮喘的遗传学机制
• 三、哮喘治疗现状及相关的研究
• （1） 哮喘的药物治疗
• （2） 哮喘的特异性免疫治疗
• （3） 哮喘治疗药物研究
• （4） 哮喘的基因治疗
• （5） 细胞因子调节治疗
• （6） 支气管热成型治疗
• （7） 哮喘患者的教育和管理
• 四、蛋白质精氨酸甲基化及其生物学功能
• 五、蛋白质精氨酸甲基转移酶家族及其催化的甲基化
• 六、CARM1 与NF-ΚB信号转导通路
• 正文
• 实验一 建立卵清蛋白豚鼠哮喘模型
• 1 材料
• 1.1 动物及主要试剂
• 1.2 主要试验仪器
• 1.3 主要试剂配制
• 2 方法
• 2.1 哮喘模型的建立
• 2.2 豚鼠哮喘模型的建立及分组
• 2.3 灌注、标本采集及切片
• 2.4 HE染色步骤
• 3 结果
• 4 讨论
• 实验二 免疫荧光技术检测CARM1 和NF-ΚB（P65）的表达变化及地塞米松的干预作用
• 1 材料
• 1.1 动物及主要试剂
• 1.2 主要试验仪器
• 1.3 主要试剂配制
• 2 方法
• 2.1 肺组织间接免疫荧光CARM1 与NF-κB双标记染色步骤
• 2.2 荧光显微镜观察及计数
• 2.3 统计学分析
• 3 结果
• 4 讨论
• 小结
• 参考文献
• 个人简历和研究成果
• 致谢