PICK1在睾丸组织中的表达及其与男性生育力关系的初步研究

论文摘要

目的据世界卫生组织统计,全球约10%-15%的育龄夫妇存在不孕不育问题,男性因素占49%左右,其中无精症是男性不育的重要原因之一。对于生精功能轻度受抑的无精症患者,通过卵胞浆内单精子注射（intra-cytoplasmic sperm injection, ICSI）可以获得生育后代的机会,但ICSI技术本身的遗传学风险不容忽视；对于睾丸内无精子生成或精子极少的患者,目前临床上尚无有效的治疗方法。如何使无精症患者经济安全的获得亲缘性后代成为临床研究亟待解决的问题。蛋白激酶Ca相互作用蛋白--PICK1 （proteininteracting with Cαkinase 1）于1995年首次发现,能与40多种蛋白发生相互作用,执行多种功能,广泛分布于机体的各种组织（脑和睾丸中含量最高,肺中含量最低）。PICK1蛋白含一个PDZ结构域和一个BAR结构域,PDZ结构域能和许多膜蛋白结合,而BAR结构域能与脂质分子（主要为磷酸肌醇）相结合,通过这种机制PICK1可调节相关蛋白的亚细胞定位和膜表达。PICK1与绝大多数配体蛋白的相互作用是通过其PDZ结构域与配体C末端区域的结合介导的,使PICK1的PDZ结构域成为一个潜在的药物靶点。因此,可以利用生物小分子物质特异性地结合PICK1的PDZ结构域,干扰或阻断PICK1与配体蛋白的天然相互作用,最终达到治疗相关疾病的目的。目前国内外对该因子的研究主要侧重于其在神经系统中的作用机制,如：参与学习与记忆,参与外周神经感觉过程,参与神经介质传递与调节等。PICK1在神经元以外细胞中的功能还未进行深入研究。最近有研究表明：PICK1可以通过干扰精子顶体的形成造成小鼠不育,基因敲除PICK1的小鼠的睾丸体积减小、精子顶体畸形,同时敲除PICK1基因的小鼠生精小管凋亡增加。基于此,设计本研究,旨在通过检测PICK1在不同病理分型的无精症患者睾丸组织中表达的差异,探讨精子发生是否与PICK1表达强度有关,通过PICK1表达强度与受精率、卵裂率、优质胚胎率及临床妊娠率的关系,初步探讨PICK1与男性生育力的相关性。方法选择郑州大学第一附属医院生殖中心就诊的无精子症患者,睾丸容积均≥12 m1,排除染色体异常,取睾丸组织行睾丸病理诊断及PICK1检测。根据不同病理分型结合Johnson评分分成四组：唯支持细胞综合征（SCOS）组14例、生精功能阻滞（MA）组12例、生精功能低下（HS）组9例,生精功能基本正常（OA）组15例,采用免疫组化方法检测PICK1在四种病理分型的无精症患者睾丸组织中的表达情况,并使用图文分析系统测量PICK1的积分光密度（IOD）值。生精功能正常组和生精功能低下组患者进一步用睾丸精子行ICSI助孕治疗,分析两组患者ICSI后的受精率、卵裂率、优质胚胎率和临床妊娠率,探讨PICK1与男性生育力的相关性。结果1. PICK1在四种病理分型的无精症患者睾丸组织中的表达：PICK1蛋白在唯支持细胞综合征、生精功能阻滞组、生精功能低下组、生精功能基本正常组的IOD值分别为1.91±1.01、106.73±8.70、127.79±4.94、147.67±7.48；PICK1在四组中的表达量,呈现明显上升趋势,组间差异有统计学意义,P<0.05；2. PICK1与男性生育力的相关性：生精功能低下组和生精功能基本正常组在受精率方面差异有统计学意义（69.1% vs 82.8%,P<0.05）；两组的卵裂率、优质胚胎率和临床妊娠率差异无显著性（68.8% vs 72.1%；40.9% vs 45.5%；20.00% vs 36.8%,P>0.05）;结论1. PICK1在睾丸组织中表达下调可能是导致雄性生精功能障碍的原因之一。2. PICK1的表达程度可能与无精子症患者潜在生育力有关。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 英文缩略词表
• 图和附表
• 引言
• 1 PICK1在无精症患者睾丸组织的表达
• 1.1 研究对象和分组标准
• 1.1.1 对象纳入标准
• 1.1.2 睾丸组织标本收集
• 1.1.3 标本处理与分组
• 1.1.4 分组标准
• 1.2 主要试剂和仪器
• 1.2.1 主要试剂
• 1.2.2 主要仪器和材料
• 1.3 实验方法步骤
• 1.3.1 脱蜡和水化
• 1.3.2 高压抗原修复
• 1.3.3 免疫组织化学染色
• 1.4 结果判断
• 1.5 统计学处理
• 1.6 结果
• 1.7 讨论
• 参考文献
• 附图
• 2 不同PICK1表达的无精子症患者行ICSI的结局比较
• 2.1 材料与方法
• 2.1.1 研究对象
• 2.1.2 精子的获取
• 2.1.3 卵母细胞的采集与处理
• 2.1.4 ICSI受精、胚胎培养与胚胎移植
• 2.1.5 实验数据计算标准
• 2.1.6 统计学分析
• 2.2 结果
• 2.2.1 一般情况
• 2.2.2 ICSI治疗结果
• 2.3 讨论
• 参考文献
• 结论
• 综述 男性不育的病因与治疗
• 参考文献
• 致谢
• 个人简历
• 攻读学位期间发表文章及参加会议情况